大肠菌群检验技术.pptVIP

大肠菌群检验技术第一页，共十九页，2022年，8月28日

大肠菌群分布较广,在温血动物粪便和自然界广泛存在。调查研究表明,大肠菌群细菌多存在于温血动物粪便、人类经常活动的场所以及有粪便污染的地方,人、畜粪便对外界环境的污染是大肠菌群在自然界存在的主要原因。粪便中多以典型大肠杆菌为主,而外界环境中则以大肠菌群其他型别较多。大肠菌群是作为粪便污染指标菌提出来的,主要是以该菌群的检出情况来表示食品中有否粪便污染。大肠菌群数的高低,表明了粪便污染的程度,也反映了对人体健康危害性的大小。粪便是人类肠道排泄物,其中有健康人粪便,也有肠道患者或带菌者的粪便,所以粪便内除一般正常细菌外,同时也会有一些肠道致病菌存在（如沙门氏菌、志贺氏菌等）,因而食品中有粪便污染,则可以推测该食品中存在着肠道致病菌污染的可能性,潜伏着食物中毒和流行病的威胁,必须看作对人体健康具有潜在的危险性。简介第二页,共十九页,2022年,8月28日

大肠菌群检验方法由于大肠菌群指的是具有某些特性的一组与粪便污染有关的细菌，即:需氧及兼性厌氧、在37℃能分解乳糖产酸产气的革兰氏阴性无芽胞杆菌。因此大肠菌群的检测一般都是按照它的定义进行。目前国内采用的进出口食品大肠菌群检测方法主要有国家标准和原国家商检局制订的行业标准。两个标准方法在检测程序上略有不同。第三页,共十九页,2022年,8月28日

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国家标准采用三步法即:乳糖发酵试验分离培养证实试验检验:国家标准第五页,共十九页,2022年,8月28日

乳糖发酵实验样品稀释后,选择三个稀释度,每个稀释度接种三管乳糖胆盐发酵管。36±1℃培养48±2h,观察是否产气。第六页,共十九页,2022年,8月28日

分离培养将产气发酵管培养物转种于伊红美蓝琼脂平板上,36±1℃培养18-24h,观察菌落形态。第七页,共十九页,2022年,8月28日

证实实验挑取平板上的可疑菌落,进行革兰氏染色观察。同时接种乳糖发酵管36±1℃培养24±2h,观察产气情况。第八页,共十九页,2022年,8月28日

报告根据证实为大肠杆菌阳性的管数,查MPN表,报告每100ml（g）大肠菌群的MPN值。具体操作参见GB4789.3-94《中华人民共和国国家标准食品卫生微生物学检验大肠菌群测定》第九页,共十九页,2022年,8月28日

原国家商检局制订的行业标准,等效采用美国FDA的标准方法,用于对出口食品中的大肠杆菌进行检测。本方法采用两步法.推测试验.证实试验第十页,共十九页,2022年,8月28日

推测实验样品稀释后,选择三个稀释度,每个稀释度接种三管LST肉汤。36±1℃培养48±2h,观察是否产气。第十一页,共十九页,2022年,8月28日

证实实验将产气管培养物接种煌绿乳糖胆盐（BGLB）肉汤管中,36±1℃培养48±2h,观察是否产气。以BGLB产气为阳性。查MPN表,报告每ml(g)样品中大肠菌群的MPN值。第十二页,共十九页,2022年,8月28日

说明1.MPN检索表.初发酵和证实试验.产气量与倒管.挑选菌落.抑菌剂第十三页,共十九页,2022年,8月28日

1．MPN检索表:MPN为最大可能数(MostProbableNumber)的简称。这种方法,对样品进行连续系列进行稀释,加入培养基进行培养,从规定的反应呈阳性管数的出现率,用概率论来推算样品中菌数最近似的数值。MPN检索表只给了三个稀释度,如改用不同的稀释度,则表内数字应相应降低或增加10倍。注意国家标准和行业标准中所附MPN表所用稀释度是不同的,而且结果报告单位也不相同。第十四页,共十九页,2022年,8月28日

2．初发酵和证实试验:无论是国家标准的三步法还是行业标准的两步法,都利用了乳糖发酵管进行了两次发酵试验,培养基的配制略有不同,但都是为了证实培养物是否符合大肠菌群的定义,即“在37℃分解乳糖产酸产气”。初发酵阳性管,不能肯定就是大肠菌群细菌,经过证实试验后,有时可能成为阴性。有数据表明,食品中大肠菌群检验步骤的符合率,初发酵与证实试验相差较大。因此,在实际检测工作中,证实试验是必需的。第十五页,共十九页,2022年,8月28日

3．产气量与倒管:在乳糖发酵试验工作中，经常可以看到在发酵倒管内极微少的气泡（有时比小米粒还小），有时可以遇到在初发酵时产酸或沿管壁有缓缓上浮的小气泡。实验表明，大肠菌群的产气量，多者可以使发酵倒管全部充满气体，少者可以产生比小米粒还小的气泡。如果对产