化妆品中乙酰胆碱及其盐类的测定 液相色谱–串联质谱法 征求意见稿.docx

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化妆品中乙酰胆碱及其盐类的测定液相色谱–串联质谱法

警示——使用本文件的人员应有正规实验室工作的实践经验。本文件并未指出所有可能的安全问题，使用者有责任采取适当的安全和健康措施，并保证符合国家有关法规规定的条件。

1范围

本文件描述了化妆品中禁用物质乙酰胆碱及其盐类的液相色谱–串联质谱测定方法的原理、试剂和材料、仪器设备、试验步骤、试验数据处理、回收率及精密度等内容。

本文件适用于水剂类、膏霜类、乳液类和精油类化妆品中乙酰胆碱及其盐类的测定。

本文中乙酰胆碱及其盐类（以乙酰胆碱计）的检出限为0.05mg/kg，定量限为0.1mg/kg。

2规范性引用文件

下列文件中的内容通过文中的规范性引用而构成本文件必不可少的条款。其中，注日期的引用文件，仅该日期对应的版本适用于本文件；不注日期的引用文件，其必威体育精装版版本（包括所有的修改单）适用于本文件。

GB/T6682分析实验室用水规格和试验方法。3术语和定义

本文件没有需要界定的术语和定义。

4原理

试样经超声辅助溶剂萃取，正己烷除脂，离心过滤后，以液相色谱–串联质谱法测定，外标法定量。

5试剂和材料

除非另有规定，所用试剂均为分析纯。

5.1水，GB/T6682，一级。

5.2乙腈：色谱纯。

5.3乙酸：色谱纯。

5.4正己烷：色谱纯。

5.5乙酸铵：分析纯。

5.6乙酰胆碱标准物质：分子式C7H16NO2，CAS号51-84-3，相对分子质量146.2，纯度均不小于99.0%，化学结构式见附录A中图A.1。

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5.750%乙腈–水：量取25mL乙腈（5.2）置于50mL容量瓶中，加入25mL水并定容至刻度，得到50%乙腈–水（体积分数）。

5.8乙酰胆碱标准储备液（100mg/L）：用分析天平（6.2）称取乙酰胆碱标准物质（5.6）0.010g（精确至0.0001g）至100mL容量瓶（6.6）中，用50%乙腈–水（5.7）溶解并定容至刻度，于4°C避光保存，可使用三个月。

5.9具塞聚四氟乙烯塑料离心管：15mL。

5.10微孔滤膜：0.22μm，有机相。

6仪器设备

6.1液相色谱–串联质谱（LC-MS/MS）仪：配电喷雾离子源（ESI）。

6.2分析天平：感量为0.001g和0.0001g。

6.3超声波清洗器：功率不低于400W/40kHz。

6.4离心机：转速不低于8000r/min。

6.5具塞比色管：10mL。

6.6容量瓶：100mL。

7试验步骤

7.1样品处理

7.1.1水剂类样品

称取0.5g（精确至0.001g）试样，置于10mL具塞比色管（6.5）中，加入2mL50%乙腈–水（5.7），涡旋分散均匀，继续加入8mL50%乙腈–水（5.7），在超声波清洗器（6.3）中超声提取20min，冷却至室温；将样液转移至15mL具塞聚四氟乙烯塑料离心管（5.9）中，8000r/min离心10min，取部分上清液，经0.22μm微孔滤膜（5.10）过滤后，滤液供上机测定。

7.1.2膏霜、乳液和精油类样品

称取0.5g（精确至0.001g）试样，置于10mL具塞比色管（6.5）中，加入2mL50%乙腈–水（5.7），涡旋分散均匀，再加入2mL正己烷（5.4）和8mL50%乙腈–水（5.7），涡旋振荡1min，在超声波清洗器（6.3）中超声提取20min，冷却至室温；弃去上层正己烷，吸取下层样液至15mL具塞聚四氟乙烯塑料离心管（5.9）中，8000r/min离心10min，经0.22μm微孔滤膜（5.10）过滤后，滤液供上机测定。

7.1.3平行试验

平行做两份试验。

7.2测定条件

7.2.1液相色谱参考工作条件

液相色谱参考工作条件如下：

a)色谱柱：HILIC柱，1.7μm，100mm×2.1mm（内径），或相当者；

b)流动相：A-10mM乙酸铵水溶液（含0.1%乙酸）；B-乙腈；梯度洗脱：0~2min，95%B；2~4min，95%B~60%B；4~6min，60%B；6~6.1min，60%B~95%B；6.1~8min，95%B；

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c)流速：0.3mL/min；

d)柱温：30°C；

e)进样量：2μL；

7.2.2质谱