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实验五蛋白质的颜色反响

及沉淀反响

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蛋白质颜色反响原理

蛋白质分子中的某种或某些基团与显色剂作用，可产生特定的颜色反响

不同蛋白质所含氨基酸不完全相同，颜色反响亦可不同。颜色反响不是蛋白质

的专一反响，一些非蛋白物质亦可产生相同的颜色反响，因此不能仅根据颜色

反响的结果断定被测物是否是蛋白质。颜色反响是一些常用的蛋白质定量测定

的依据

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常见的蛋白质颜色反响

1.米伦氏反响

2.双缩脲反响

3.黄色反响

4.茚三酮反响

5.乙醛酸反响

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〔一〕米伦氏〔Millon〕反响

原理：米伦试剂为硝酸、亚硝酸、硝酸汞和亚硝酸汞之混合物，能与苯酚、

双酚及某些羟苯衍生物产生颜色反响。这些反响最初产生的有色物质可能为羟

苯之亚硝基衍生物，经变位作用变成颜色更深的邻醌肟，最终形成红色稳定产

物。组成蛋白质的氨基酸中只有酪氨酸为羟苯衍生物，因此该反响为酪氨酸的

显色反响〔酚羟基反响〕。

本卷须知：加热时容易产

暴沸，要注意平安，应温和加热。

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〔二〕双缩脲反响

原理：将尿素加热，两分子尿素放出一分子氨而形成双缩脲。双缩脲在碱性环境

中，能与硫酸铜结合成红紫色的络合物，此反响为双缩脲反响。蛋白质分子中含有肽

键与缩脲结构相似，故能呈此反响。一般肽键越多颜色越深，而且受蛋白质特异性影

响小

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本卷须知：硫酸铜不能多加，否那么会产生影响观察的蓝色络离子

Cu(NH3)42+

〔三〕黄色反响

原理：蛋白质分子中含有苯核结构的氨基酸〔如酪氨酸、色氨酸等〕，遇到硝酸

可硝化成黄色物质，此物质在碱性环境中变为橘黄色的硝苯衍生物。这是含酪氨酸和

色氨酸蛋白质所特有的反响。皮肤、指甲和毛发等遇浓硝酸变黄，原因在此。

〔四〕茚三酮反响

原理：蛋白质与茚三酮共热，那么产生蓝色的复原茚三酮、茚三酮和氨的缩合

物。此反响为一切蛋白质及－氨基酸所共有。

本卷须知：反响必

须在pH5-7进行。

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〔五〕乙醛酸反响

含色氨酸的蛋白质在浓硫酸中与一些醛类反响

能形成有色物质。此反响可作为色氨酸的定性定量

反响。

实验步骤

１、在蛋白质溶液中参加

HCOCOOH，将浓硫酸沿管壁

缓慢参加，不使相混，在液

面交界处，即有紫色环形成

２、色氨酸的反响〔吲哚环

的反响〕

３、鉴定蛋白质中是否含有

色氨酸

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蛋白质沉淀反响原理

在水溶液中蛋白质分子的外表由于形成水化层和双电层，而成为稳定的胶

颗粒。但这种稳定性是有条件的、相对的。在一定的物理化学因素影响下，蛋白

质颗粒失去电荷，脱水，甚至变性而丧失稳定因素，即以固态形式从溶液中析出，

这种作用称为蛋白质的沉淀反响。

可逆沉淀反响：在发生沉淀反响时，蛋白质虽已沉淀析出，蛋白质分子内部结

构并未发生显著变化，根本上保持原有的性质。除去沉淀因素后，蛋白质沉淀可

再溶于原来的溶剂中。

不可逆沉淀反响：在发生沉淀反响时，蛋白质分子内部结构，特别是天然结构

遭到破坏，失去其天然蛋白质的原来性质，这种蛋白质沉淀不能再溶解于原来的

溶剂中。

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常见的蛋白质沉淀反响