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实验四PCR基因扩增
实验四PCR基因扩增
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实验目的
实验目的
l通过本实验学习PCR反响的根本原理与
实验技术。
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实验原理
实验原理
l聚合酶链式反响(polymerasechain
reaction,PCR)，是一种在体外快速扩增
特定基因或DNA序列的方法，故又称为基
因的体外扩增法。
l在待扩增的DNA片断两侧和与其两侧互补
的两个寡核苷酸引物，经变性、退火和
延伸假设干个循环后，DNA扩增2n倍。
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PCR技术的原理
PCR技术的原理
l1.变性：在加热或碱性条件下可使DNA双螺旋
的氢键断裂，形成单链DNA，称之为变性。
l2.退火：是模板与引物的复性。引物是与模板
某区序列互补的一小段DNA片段。
l3.延伸：从结合在特定DNA模板上的引物为出
发点，将四种脱氧核苷酸以碱基配对形式按
5’→3’的方向沿着模板顺序合成新的DNA链。
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靶DNA的扩增
靶DNA的扩增
5’3’
5’3’
(a)
(a)
5’3’
引物25’3’
引物2
(b)
(b)3’5’
3’5’引物1
引物1
5’
5’3’
3’
引物2互补链引物1互补链
引物互补链引物互补链
(c)21
(c)
3’5’
3’5’
3’
3’5’
(d)5’
(d)
新引物
新引物
5’3
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