血液制品去除灭活病毒技术方法.docxVIP

血液制品去除灭活病毒技术方法

血液制品去除灭活病毒技术方法???目前已知经血液制品传染的病毒主要有HBV、HCV、HIV-1、HIV-2、HTLV和细小病毒B19。尚未发现经血液制品传染CJD。但有少数研究报告发现有实验性传染现象，因此要密切关注CJD，特别是vCJD的发展动向。

???为了提高血液制品安全性，生产工艺要具有一定的去除/灭活部分病毒能力，生产过程中应有特定的去除/灭活病毒方法。本技术指导原则是对血液制品生产过程以及特定的去除/灭活病毒方法验证的指导原则，包括指示病毒和病毒去除/灭活方法的选择、验证方案的设计、结果判定以及附录所列技术验证申报的程序。

???一、去除/灭活病毒方法的选择???由于不同类血液制品潜在的污染病毒的可能性不同，为此选择病毒去除/灭活方法的侧重点也应有所不同：

???凝血因子类制品???生产过程中应有特定的能去除/灭活脂包膜和非脂包膜病毒的方法，可采用一种或多种方法联合去除/灭活病毒。

???免疫球蛋白类制品???对于免疫球蛋白类制品生产过程中应有特定的灭活脂包膜病毒方法。但从进一步提高这类制品安全性考虑，提倡生产过程中加入特定的针对非脂包膜病毒的去除/灭活方法。

???白蛋白???采用低温乙醇生产工艺和特定的去除/灭活病毒方法，如巴斯德消毒法等。

???二、常用的去除/灭活病毒方法评价???巴斯德消毒法???1．人血白蛋白制品???几十年临床应用结果表明，白蛋白的巴氏消毒法对HIV和肝炎病毒是安全的。其病毒灭活条件已很完善，可不要求进行病毒灭活验证。但是必须对巴氏消毒法所用设施进行验证，使巴氏消毒各参数符合要求。

???2．其它血液制品???由于制品的组成、稳定剂及其浓度的不同，均会对灭活病毒效果有一定的影响。因此在采用巴氏消毒灭活病毒方法时必须进行病毒灭活效果验证。

???干热法???80℃加热72小时，可以灭活HBV、HCV、HIV和HAV等病毒。但应考虑制品的水分含量、制品组成对病毒灭活效果的影响。应确定允许的制品瓶间各参数的差异。病毒灭活用的干热箱至少每半年验证一次。验证时干燥箱内应设多个测温点。

???有机溶剂/去污剂处理法???有机溶剂，如：磷酸三丁脂和非离子化的去污剂，如：TritonX-100或吐温-80结合可以灭活脂包膜病毒，但对非脂包膜病毒无效。常用的灭活条件是0.3%TNBP和1%吐温-80，在24℃处理至少6小时；

0.3%TNBP和1%TritonX-100，在24℃处理至少4小时。S/D处理前应先用1μm滤器除去蛋白溶液中可能存在的颗粒。加入S/D后应确保是均一的混合物。在灭活病毒全过程中应将温度控制在规定的范围内。如果在加入S/D后过滤，则须检测过滤后S/D的浓度是否发生变化，如有变化应进行适当调整。吐温-80应采用植物源性，并应采用称量法量取。

???膜过滤法???膜过滤技术只有在滤膜的孔径比病毒有效直径小时才能有效除去病毒。该方法不能单独使用，应与其它方法联合使用。

???验证研究时应考虑蛋白溶液的浓度、滤速、压力和过滤量等重要参数。在过滤前及过滤后应测试滤膜的完整性。

???低pH孵放法???研究表明，免疫球蛋白生产工艺中的低pH处理能灭活几种脂包膜病毒。灭活条件可能影响病毒灭活效果，验证试验应该研究这些参数允许变化的幅度。

???三、特定的去除/灭活病毒方法验证???指示病毒的选择???首先，应该选择经血液传播的相关病毒，不能用相关病毒的，要选择与其理化性质尽可能相似的指示病毒；

第二，所选择的病毒理化性质应有代表性，其中至少应包括一种对物理和/或化学处理有明显抗性的病毒。在进行去除/灭活病毒验证时，应根据制品的特性及所采用的病毒去除/灭活工艺，参照下表列举的病毒选择适宜的指示病毒。所选择的指示病毒至少应包括HIV-1、HBV和HCV模拟病毒以及非脂包膜病毒。水疱性口炎病毒耐受的pH范围比较广，验证低pH孵放法灭活病毒效果时可选用此指示病毒。

???????????经血液传播疾病的相关病毒及验证可选用的指示病毒???┌──┬───┬───┬──────┬──────────────┐???│病毒│基因组│脂包膜│大小│???????指示病毒举例???????│???├──┼───┼───┼──────┼──────────────┤???│HIV│RNA?│?有?│??80-100??│???????????HIV????