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实验六目的基因的PCR扩增
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一、实验目的
一、实验目的
通过本实验学习PCR反响的根本原理，掌握
PCR的根本操作技术以及琼脂糖凝胶电泳技术。
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二、实验原理
二、实验原理
PCR〔polymerasechainreaction)：
聚合酶链式反响，又称体外DNA扩增
技术。
是一种体外扩增特异DNA片段的技术。
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二、实验原理
二、实验原理
PCR用于扩增位于两端序列之间的DNA区
段，即通过引物延伸而进行的重复双向DNA合成。
根本原理及过程如下：
PCR循环过程中有三种不同的事件发生：〔
1〕模板变性
〔2〕引物退火
〔3〕热稳定DNA聚合酶进DNA延伸合成。
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二、实验原理
二、实验原理
1、变性：加热使模板DNA在高温下〔94-95℃〕变性，双
链间的氢键断裂而形成两条单链，即变性阶段。
2、退火：在体系温度降至37-65℃，模板DNA与引物按碱基
配对原那么互补结合，使引物与模板链3’端结合，形成局
部
双链DNA，即退火阶段。
3、延伸：体系反响温度升至中温72℃，耐热DNA聚合酶以单
链DNA为模板，在引物的引导下，利用反响混合物中的4
种脱氧核苷三磷酸〔dNTP〕，按5’到3’方向复制出互补
DNA，即引物的延伸阶段。
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5’3’
模板3’5’
高温变性
引物对
低温退火
中温延伸
不断循环
目的片段
聚合酶链式反应示意图
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二、实验原理
二、实验原理
上述3步为一个循环，即高温变性、低温退火、
中温延伸3个阶段。从理论上讲，每经过一个循环，
样本中的DNA量应该增加一倍，新形成的链又可成为
新一轮循环的模板，经过25～30个循环后DNA可扩增
106～109倍。
典型的PCR反响体系由如下组分组成：DNA模
板、反响缓冲液、dNTP、MgCl2、两条合成的DNA
引物、耐热DNATaq聚合酶。
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二、实验原理
二、实验原理
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