细菌分离培养.ppt

细菌的分离纯化技术分离纯化：使微生物共生群体分离开，得到纯培养物的过程称微生物的纯分离技术。得到的纯培养物称纯种。纯种：指一种或一株微生物培养物中所有的细胞只来源同一个细胞的后代。分离纯化技术是细菌学实验中最基本的技术之一临床送检样品或混杂的样品分离受杂菌污染的菌种细菌纯培养物第2页,共30页，星期六，2024年，5月试验内容：1.需氧菌的分离移植和增菌平板划线分离营养（普通）斜面接种营养（普通）肉汤增菌2.厌氧菌的分离培养方法（本次试验不做）生物学方法、化学方法、物理学方法第3页,共30页，星期六，2024年，5月实验要求：掌握：掌握细菌分离培养的基本要领和方法掌握无菌操作程序掌握细菌在培养基上生长特点认识：认识菌落形态第4页,共30页，星期六，2024年，5月无菌操作工具第5页,共30页，星期六，2024年，5月接种工具第6页,共30页，星期六，2024年，5月分离纯化法：（细菌分离纯化）1、平板划线法2、稀释涂布平板法3、稀释混合（倾注）平板法4、显微操作器单细胞挑取法5、棋盘格划线法

第7页,共30页，星期六，2024年，5月1.平板划线：将蘸有混合细菌的接种环在平板表面多方向连续划线，使混杂的微生物细胞在平板表面分散，浓度变稀，经培养得到由单个细胞繁殖而成的菌落，从而达到纯化。第8页,共30页，星期六，2024年，5月1.平板划线：平板划线的原则和目的：第9页,共30页，星期六，2024年，5月图1平板画线法A、B、C分别为1、2、3次画线ABC第10页,共30页，星期六，2024年，5月注意手势

1.培养皿与酒

精灯的距离

2.左手打开培

养皿的动作

3.右手握接种

棒的姿势

4.右手划线的

运作姿势第11页,共30页，星期六，2024年，5月分区划线：

多用于粪便等含菌量较多的标本。

每划一个区域，将接种环烧灼一次，待冷却后再划下一个区域。每一区域的划线应接触上一区域接种线的2~3次，使菌量逐渐减少，以形成单个菌落。

第12页,共30页，星期六，2024年，5月连续划线（曲线划线）：分离含菌量较少的培养物右手持接种环，通过火焰灭菌，冷却后，挑取标本或培养物少许第13页,共30页，星期六，2024年，5月1.平板划线：第14页,共30页，星期六，2024年，5月1432第15页,共30页，星期六，2024年，5月细菌在固体培养基中的生长情况：单个菌落（S型）菌苔菌落（R型）第16页,共30页，星期六，2024年，5月细菌的培养特征：

不同种类的细菌在固体、半固体和液体培养基中可表现出各自特有的培养特征。可以作

为细菌鉴别的特征之一。

第17页,共30页，星期六，2024年，5月细菌在固体培养基中生长表现：

1、大小（mm表示。1mm以内露滴状；1-2mm小菌落。

2--4mm中等大菌落；4-6mm以上称大菌落或巨大菌落）

2、形状（圆形、不规则形）

3、边缘（整齐、锯齿状）

4、表面性状（光滑、粗糙）

5、隆起度（扁平、隆起、中凸）

6、颜色及透明度（黄色、灰白、光泽、透明）

7、硬度（干燥、湿润、粘液）

8、溶血（在血培养基上的表现）

第18页,共30页，星期六，2024年，5月2.斜面移植法：培养，保存菌种及其它。第19页,共30页，星期六，2024年，5月手执塑料杆处手执试管底露出斜面试管口离火焰1cm小指夹棉塞第20页,共30页，星期六，2024年，5月第21页,共30页，星期六，2024年，5月培养后生长的斜面菌种第22页,共30页，星期六，2024年，5月液体培养基接种法：

用于增菌及纯培养细菌的生长特点观察，如表面生长，沉淀生长，均匀混浊生长等。

第23页,共30页，星期六，2024年，5月细菌在液体培养基中生长的三种不同现象

混浊：细菌均匀弥漫扩散，出现不同程度混浊。

沉淀：细菌由下沉。肉眼可见沉淀物（颗粒絮状）

菌膜：需氧菌易在液面生长，形成可见的菌膜，菌环。第24页,共30页，星期六，2024年，5月第25页,共30页，星期六，2024年，5月操作顺序：

接种环灭菌勾取细菌取棉塞接种塞棉塞接种环灭菌标记培