细胞重组与细胞融合.ppt

原生质体的培养①液体培养液体浅层培养②固体平板法③固液双层培养法?琼脂糖珠培养第49页,共50页，星期六，2024年，5月*感谢大家观看第50页,共50页，星期六，2024年，5月密度梯度离心：用一定的介质在离心管内形成一连续或不连续的密度梯度，将细胞混悬液或匀浆置于介质的顶部，通过重力或离心力场的作用使细胞分层、分离。第17页,共50页，星期六，2024年，5月密度梯度离心又可分为速度沉降和等密度沉降平衡两种1、速度沉降主要用于分离密度相近而大小不等的细胞或细胞器。这种沉降方法所采用的介质密度较低，介质的最大密度应小于被分离生物颗粒的最小密度。生物颗粒（细胞或细胞器）在十分平缓的密度梯度介质中按各自的沉降系数以不同的速度沉降而达到分离。2、等密度沉降适用于分离密度不等的颗粒。细胞或细胞器在连续梯度的介质中经足够大离心力和足够长时间则沉降或漂浮到与自身密度相等的介质处，并停留在那里达到平衡，从而将不同密度的细胞或细胞器分离。介质的最高密度应大于被分离组分的最大密度，而且介质的梯度要求较高的陡度，不能太平缓。这种方法适于分离细胞器，而不太适于分离和纯化细胞。第18页,共50页，星期六，2024年，5月速度沉降等密度沉降第19页,共50页，星期六，2024年，5月三、细胞器转移细胞器转移是将一个物种的细胞器转移到另一个物种细胞中的技术。细胞器转移类似细胞核移植技术。不同的是操作对象为细胞器，不是细胞核。最常见的是线粒体和叶绿体的细胞器转移。细胞器转移方法有微注射、载体转移、胞吞胞饮等方式。第20页,共50页，星期六，2024年，5月四、胞质杂种概念一：将两种不同来源的核外遗传物质（线粒体和叶绿体）与一个特定的细胞核组合在一起得到的细胞称为胞质杂种。概念二：来自两个原生质体融合产生的细胞，其中一个细胞的细胞核消失后，两个亲代原生质的细胞质杂交得到的个体成为胞质杂种。核心概念是细胞质的杂交，不是细胞核，其中细胞质中存在不同来源的细胞器，尤其是线粒体和叶绿体。第21页,共50页，星期六，2024年，5月细胞融合细胞融合(Cellfusion)：又称体细胞杂交，是指使用人工方法使两个或两个以上的体细胞合并形成一个细胞，使之分化再生，形成新物种或新品种的技术。细胞融合方法包含人工方法和无性方法1、人工方法：是指在外力使用诱导剂或促融剂、电场、磁场、超声波、重力、激光等因素的作用。2、无性方式：是区别于有性方式而言的，有自然条件下，生殖细胞卵子和精子相互接触会发生细胞融合的现象。第22页,共50页，星期六，2024年，5月1838-1875年：在血液组织中发现有多核细胞；20世纪50年代：日本科学家发现仙台病毒可以引起细胞的融合；1965年：英国的科学家海利斯成功得到了融合细胞；1964年：HAT（次黄嘌呤(hypoxantin)、氨基蝶呤(aminopterin)和胸腺嘧啶脱氧核苷(thymidin)）选择培养基应用于融合细胞的选择；1974年：加拿大华裔科学家高国楠发现聚乙二醇（PEG）能够促使植物的原生质体融合；1982年：出现了电融合技术；近20年：从细胞融合的理论和实践两个方面进行了大量研究，细胞融合的方法不断更新和完善，融合率逐步提高。细胞融合技术的发展史第23页,共50页，星期六，2024年，5月生物种类细胞来源成功年代烟草两个种间苷蓝——青菜大豆——马唐草矮牵牛——龙面花大麦——花生大麦——大豆小麦——矮牵牛油菜——大豆玉米——大豆大豆——野豌豆大麦——蚕豆大豆——草香木犀酵母菌——鸡大豆——烟草大豆——秋水仙人——胡萝卜番茄——马铃薯人——小鼠叶——叶叶——根愈伤组织——叶叶——花瓣种子——种子叶——悬浮细胞叶——花瓣叶——悬浮细胞叶——悬浮细胞悬浮细胞——悬浮细胞叶——根悬浮细胞——叶原生质体——血红细胞悬浮细胞——叶悬浮细胞——叶腹水癌细胞——原生质体叶——根尖纤维肉瘤细胞——畸胎瘤细胞197219721972197319741974197419741974197419751976197619761976197619781978几种细胞融合成功的例子第24页,共50页，星期六，2024年，5月细胞融合的类型异核体：来自两个不同基因型的细胞融合成的融合细胞。同核体：基因型相同的细胞融合成的融合细胞。细胞融合包括对称融合和不对称融合。1、对称融合：两个完整的细胞间的融合。2、不对称融合：其中一个细胞通过物理、化学或者生物的方法使该细胞的细胞核或者细胞质失活后再与另一个完整的细胞进行