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新版实验光学显微镜的使用和显微绘图.ppt

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试验1

光学显微镜使用

及显微绘图12024/10/16新版实验光学显微镜的使用和显微绘图第1页

一、目标要求(1)熟悉显微镜结构和各部件性能。(2)掌握低倍镜/高倍镜正确使用方法,掌

握油镜使用方法。(3)掌握显微绘图基本方法(4)了解细胞基本结构,动物、植物和微

生物细胞基本共性和特征22024/10/16新版实验光学显微镜的使用和显微绘图第2页

二、仪器设备及材料1.光学显微镜/显微摄影系统(带油浸物镜)2.目镜测微尺及镜台测微尺3.香柏油、二甲苯4.永久装片、擦镜纸32024/10/16新版实验光学显微镜的使用和显微绘图第3页

普通生物显微镜42024/10/16新版实验光学显微镜的使用和显微绘图第4页

显微摄影系统52024/10/16新版实验光学显微镜的使用和显微绘图第5页

三、显微镜结构1.机械部分支持和调整光学系统Charge-coupledDevice62024/10/16新版实验光学显微镜的使用和显微绘图第6页

三、显微镜结构2.光学系统72024/10/16新版实验光学显微镜的使用和显微绘图第7页

三、显微镜结构3.显微镜能力显微镜能力是质量和性能标志。能力包含分辨率、放大率、焦点深度和视场宽度等,其中最主要是分辨率。R:分辨率(分辨两个点最短距离),

R值愈小,分辨率越大。λ:照明光线波长(可见光平均波长

约550nm)。N.A.:物镜镜口率n:物镜和被检物体之间介质折射率α:物镜镜口角(从物镜光轴上物点所发出光线与物镜前透镜有效直径边缘所张角度)。82024/10/16新版实验光学显微镜的使用和显微绘图第8页

表1在550nm光波下不一样物镜分辨距离放大倍数(×)1040100镜口率(N.A.)0.280.651.25分辨距离(d)1μm0.42μm0.22μm92024/10/16新版实验光学显微镜的使用和显微绘图第9页

科勒照明优点:视场照明均匀,样品不受热,不产生刺眼眩光,影像清楚。1893年德国出色学者AugustKohler提出柯勒照明法。其详细做法:在光源与聚光器之间,加放一光源聚光镜和视场光阑,光源聚光镜把光线集成光锥,使光源灯成像于聚光器孔径光阑平面处。同时,聚光器又使视场光阑成像在样品平面处。由此充分地利用了照明光源,使点状光源到达较大照明,从而使样品得到均匀照明,并预防了高温。这对显微摄影和镜检观察至关主要。102024/10/16新版实验光学显微镜的使用和显微绘图第10页

四、油镜原理油镜(油浸系物镜,通常有黑圈或Oil标志),以香柏油或石蜡油为介质。这类油折射率与玻璃折射率大致相同。光线从被检物体直接射入物镜,其间因折射或反射而引发光线损失很小,所以能够充分利用镜口角,显著提升物镜分辨率。油镜(镜口率普通在1.25左右)分辨率在0.2?m左右,这就是光学显微镜分辨极限。表1几个物质折射率介质空气水石蜡油香柏油加拿大树胶光学玻璃折射率(n)1.0031.331.471.5151.515110/16新版实验光学显微镜的使用和显微绘图第11页

五、显微镜使用方法使用显微镜要领就是从低倍物镜开始观察,先粗调后细调。

在低倍物镜下找到要观察东西后,再逐步加大物镜倍数,仔细观察。122024/10/16新版实验光学显微镜的使用和显微绘图第12页

低倍镜使用(1)检验:各部件有没有损坏,如发觉问题,马上汇报教师请求处理。(2)准备:将显微镜放于前策略偏左侧方便观察。打开电源开关,观察底座光路中是否有光亮。慢慢调整同一旋钮,光线应逐步增强。转动粗调整钮,将载物台下降使物镜与载物台距离略拉开。再旋转物镜转换器,将低倍镜4X对准载物台中央通光孔(可听到“咔哒”声)。(3)放标本片:标本片标签面向上,用标本夹夹好,把要观察部分移到通光孔正中央。(4)调整焦距:边从目镜中观察,边调整粗聚焦旋钮,使载物台迟缓上升,直至视野中出现物像为止。如物像不太清楚,可转动细调整钮,使物像愈加清楚。(5)换10X物镜观察。此时,只须稍稍调整细调整旋钮即可。132024/10/16新版实验光学显微镜的使用和显微绘图第13页

2024/10/1614低倍镜使用新版实验光学显微镜的使用和显微绘图第14页

假如按上述操作步骤仍看不到物像时,可能由以下原因造成:①转动调整钮太快,超出焦点。应按上述步骤重新调整焦距。②物镜没有对正,应对正后再观察。③标本没有放到视野内,应移动标本片寻找观察对象。④光线太强,尤其观察比较透明标本片或没有染色标本时,

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