维生素的测定 (3).ppt

可参考柱层析图第96页,共111页，星期六，2024年，5月此法不能区分D2和D3，测定值是两者的总量。第97页,共111页，星期六，2024年，5月四、维生素E的测定第98页,共111页，星期六，2024年，5月第99页,共111页，星期六，2024年，5月第100页,共111页，星期六，2024年，5月第101页,共111页，星期六，2024年，5月第102页,共111页，星期六，2024年，5月测定方法比色法荧光法GC法HPLC法（VA、VE）第103页,共111页，星期六，2024年，5月（一）HPLC法（VE）1．原理试样中的维生素E经皂化提取处理后，将其从不可皂化部分提取至有机溶剂中。用高效液相色谱法C18反相柱将维生素E分离，经紫外检测器检测，并用内标法定量测定。第104页,共111页，星期六，2024年，5月维生素A和维生素E色谱图第105页,共111页，星期六，2024年，5月(二)比色法1．原理维生素E能将高铁离子还原为低铁离子，低铁离子与α，α’—联氮苯发生颜色反应，可以进行比色测定。500nm第106页,共111页，星期六，2024年，5月3、测定步骤(1)样品处理①皂化②纯化(2)样品测定(3)标准曲线的绘制第107页,共111页，星期六，2024年，5月5．说明与讨论①维生素E在碱性条件下与空气接触易被氧化，因此在皂化时，用氮气流保护，也可加入焦性没食子酸作为抗氧化剂，防止维生素E的氧化。第108页,共111页，星期六，2024年，5月②此方法的反应没有特异性，当有其他还原性物质存在时，同样能与Fe+3反应生成Fe2+，使测定结果偏高，故处理前应将它们除去。第109页,共111页，星期六，2024年，5月⑤由于光能促进维生素E氧化，因此尽可能避光操作第110页,共111页，星期六，2024年，5月感谢大家观看第111页,共111页，星期六，2024年，5月所用氯仿中不应含有水分，因三氯化锑遇水会出现沉淀，干扰比色测定。故在每m1氯仿中应加入乙酸酐1滴，以保证脱水。说明与注意点第64页,共111页，星期六，2024年，5月维生素A见光易分解，整个实验应在暗处进行，防止阳光照射，或采用棕色玻璃避光。第65页,共111页，星期六，2024年，5月测定结果也可以每100g食品中所含维生素A的国际单位表示，每国际单位维生素A相当于0.3μg维生素A。1μg胡萝卜素=0.167μg视黄醇当量。以往VA的量常用国际单位（IU）表示。1IUVA=0.33μgVA=0.33μg视黄醇当量。第66页,共111页，星期六，2024年，5月三氯化锑腐蚀性强，不能沾在手上；三氯化锑遇水生成白色沉淀，因此用过的仪器要先用稀盐酸浸泡后再清洗。第67页,共111页，星期六，2024年，5月比色法除用三氯化锑作显色剂外，还可用三氟乙酸、三氯乙酸作显色剂。其中三氟乙酸没有遇水发生沉淀而使溶液混浊的缺点。第68页,共111页，星期六，2024年，5月(二)紫外分光光度法1.原理维生素A的异丙醇溶液在325nm波长下有最大吸收峰，其吸光度与维生素A的含量成正比。第69页,共111页，星期六，2024年，5月2．适用范围及特点本法的灵敏度较比色法高，可测定维生素A含量低于5μg／g的样品。主要缺点是在维生素A最大吸收波长325nm附近许多其他化合物也有吸收，干扰测定，第70页,共111页，星期六，2024年，5月故本法适用于透明鱼油，维生素A的浓缩物等纯度较高的样品。对于一般样品，测定前必须先将脂肪抽提出来进行皂化，萃取其不皂化部分，再经柱层析除去干扰物。第71页,共111页，星期六，2024年，5月（三）高效液相色谱法1、原理（GB/T5009.82-2003第一法）皂化、提取样品中的维生素A和维生素E后，用高效液相色谱法C18反相柱将两者分离，用紫外检测器检测，内标法定量。第72页,共111页，星期六，2024年，5月测定步骤（1）样品处理（皂化、提取、洗涤、浓缩）（2）标准曲线的制备第73页,共111页，星期六，2024年，5月二、β—胡萝卜素的测定

450nm波长处有最大吸收HPLC法（GB/T5009.83）纸层析、柱层析薄层层析法β-胡萝卜素含有两个维生素A1的结构，称为维生素A原。第74页,共111页，星期六，2024年，5月第75页,共111页，星期六，2024年，5月一、高效液相色谱法1原理试样中