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实验内容一、5%红细胞悬液配制

二、ABO血型判定（试管法、纸片法）三、Rh血型判定?abo和rh血型鉴定专业知识讲座第2页

一、5%红细胞悬液配制原理:使用一定量稀释液（生理盐水）稀释压积红细胞，遵照抗原抗体结合量比关系，获出最正确结果。器材:小试管（玻璃及塑料皆可）、加样枪、试管架、离心机、记号笔、显微镜。试剂:生理盐水。标本:抗凝或非抗凝静脉血。abo和rh血型鉴定专业知识讲座第3页

操作1、全血2ml1000g离心5min，吸收分离上清至另一洁净试管（备用）；2、压积加生理盐水约2～3ml，充分摇匀或吸管轻轻吹打混匀，再次离心去掉上清液；3、重复离心（1000g，60s）洗涤红细胞3次，去掉上清液制备压积红细胞；4.取1滴压积红细胞于1支洁净小试管中，在其中加入19滴生理盐水，用小吸管轻轻吹打混匀，就是5%红细胞悬液。abo和rh血型鉴定专业知识讲座第4页

目标：掌握ABO正反定型原理、方法。原理：红细胞凝集试验，经过正、反定型判定ABO血型。正定型：用已知血型特异性抗体（抗-A.抗-B）来测定红细胞上有没有对应抗原；反定型：用已知血型试剂红细胞测定血清中有没有对应抗体。二、ABO判定abo和rh血型鉴定专业知识讲座第5页

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器材:记号笔、小玻璃试管、滴管、试管架、离心机、判定纸板、显微镜。试剂:1.ABO血型抗体：抗A.抗B(-A.-B)；2．试剂红细胞：3％～5％Ac、Bc及Oc。3.生理盐水。标本:抗凝或非抗凝静脉血。abo和rh血型鉴定专业知识讲座第7页

操作（试管法）(1)标识试管：正定型：取洁净小试管2支，分别标明－A.－B；反定型：取3支小试管，标识Ac、Bc、Oc。(2)配5%悬浮红细胞：取静脉血2滴于小试管中，加2ml生理盐水，混匀，1000g离心60s，弃上清；重复3次。取管底1滴压积加19滴生理盐水，即为5%悬红。(3)加样：正定型管中分别加入1滴试剂和1滴悬红，反定型管中分别加入2滴血清和1滴试剂红细胞。（4）离心：1000g离心15秒。(5)结果：轻摇试管,观察有无凝集或溶血现象。abo和rh血型鉴定专业知识讲座第8页

4+红细胞凝集成一大块,血清清楚透明。3+红细胞凝集成大小块,血清清楚。2+红细胞凝块分散成许多小块,血清清楚。l+肉眼可见大颗粒,周围有较多游离红细胞。±镜下可见数个红细胞凝集在一起,周围有很多游离红细胞。mf混合凝集外观（mixedfield）指镜下可见少数红细胞凝集,而极大多数红细胞仍呈分散分布。－表示阴性,镜下未见凝集,红细胞均匀分布。红细胞凝集强度判断标准abo和rh血型鉴定专业知识讲座第9页

试管法结果判定abo和rh血型鉴定专业知识讲座第10页

表lABO血型正反定型结果试剂血清+受检红细胞受检血清+试剂红细胞（正定型）（反定型）-A-B受检血型AcBcOc ＋－ A －＋－－＋ B ＋ －－－－ O ＋ ＋－＋＋ AB －－－判断标准abo和rh血型鉴定专业知识讲座第11页

操作：玻片法(判定纸板)(1)洁净玻片(判定纸板)一张。标-A.-B，分别用滴管滴加抗-A.抗-B试剂1滴，再加受检者10％红细胞悬液l滴，混匀。(2)另取洁净玻片(或判定纸板)一张。标Ac、Bc、Oc，各加受检血清2滴，再分别滴加Ac、Bc、Oc悬红1滴。(3)室温轻转动玻片(或判定纸板)，使血清与细胞充分混匀，约2min肉眼观察凝集(溶血)反应。玻片试验时可用低倍镜观察结果。abo和rh血型鉴定专业知识讲座第12页

正定型反定型abo和rh血型鉴定专业知识讲座第13页

注意事项1.试剂2.悬红3.蛋白4.溶血5.冷抗体6.老年、儿童7.污染abo和rh血型鉴定专业知识讲座第14页

目标掌握Rh血型判定原理、方法。原理Rh血型系统，包含四十几个抗