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1.2基因工程的根本操作程序
1.2基因工程的根本操作程序
——原理∙技术∙应用
——原理技术应用∙∙
北京理工大学附属中学苏明学
北京理工大学附属中学苏明学
重组人胰岛素
重组人胰岛素
〔Humulin优泌林〕
〔Humulin优泌林〕
1982年10月全球第一个商业化基因重组
1982年10月全球第一个商业化基因重组
人类胰岛素在美国上市.
人类胰岛素在美国上市
思考1：
思考1：
如何利用大
如何利用大
肠杆菌来生
肠杆菌来生
产重组人胰
产重组人胰
岛素？
岛素？
思考2：如何从人类基因组中别离胰岛素基
思考2：如何从人类基因组中别离胰岛素基
因？
因？
基因组文库的构建——基因的别离与克隆
基因组文库的构建——基因的别离与克隆.
思考3：从基因组文库中获取人的胰岛素基
思考3：从基因组文库中获取人的胰岛素基
因，导入大肠杆菌能否成功表达？为什么
因，导入大肠杆菌能否成功表达？为什么
？
？
.
思考4：能否根据mRNA合成没有内含子的胰
思考4：能否根据mRNA合成没有内含子的胰
岛素基因？
岛素基因？
cDNA文库的构建
cDNA文库的构建
.
思考5：如何快速扩增胰岛素基因〔cDNA〕
思考5：如何快速扩增胰岛素基因〔cDNA〕
聚合酶链式反响〔PCR〕
？聚合酶链式反响〔PCR〕
？
.
u聚合酶链式反响〔PCR〕
u聚合酶链式反响〔PCR〕
l变性、退火、延伸三
l变性、退火、延伸三
步曲
步曲
Ø变性：双链DNA解链
ØDNA
变性：双链解链
成为单链DNA
成为单链DNA
Ø退火：局部引物与模
Ø退火：局部引物与模
板的单链DNA的特定
DNA
板的单链的特定
互补部位相配对和
互补部位相配对和
结合
结合
Ø延伸：以目的基因为
Ø延伸：以目的基因为
模板，合成互补的
模板，合成互补的
新DNA链
DNA
新链
.
思考6：能否根据氨基酸的序列获得人胰岛
思考6：能否根据氨基酸的序列获得人胰岛
素基因的碱基序列？
素基因的碱基序列？
.
氨基酸序列→mRNA序列→DNA序列→人工合成
→→→
氨基酸序列mRNA序列DNA序列人工合成
.DNA合成仪
DNA合成仪
思考7：选用哪种限制酶对质粒和胰岛素基因
思考7：选用哪种限制酶对质粒和胰岛素基因
进行酶切，可将目的基因插入到Tet基因内？rr
进行酶切，可将目的基因插入到Tet基因内？
思考8：重组质粒导入大肠杆菌后能表达吗？假
思考8：重组质粒导入大肠杆菌后能表达吗？假
设不能，还应做怎样修饰？
设不能，还应做怎样修饰？
.
Ø用BamHⅠ对胰岛素基因和质粒切割，参加
Ø用BamHⅠ对胰岛素基因和质粒切割，参加
DNA连接酶，得到的都是重组质粒吗？
DNA连接酶，得到的都是重组质粒吗？
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