饲料粗蛋白质GBT6432-94 .pdfVIP

饲料粗蛋白质的测定方法（GB/T6432-94）

1主题内容与适用范围

本标准规定了饲料中粗蛋白含量的测定方法。本标准适用于配合饲料、浓缩饲料和单一

饲料。

2引用范围

GB601化学试剂滴定分析（容量分析）用标准溶液的制备

3原理

凯氏法测定试样中的含氮量，即在催化剂作用下，用硫酸破坏有机物，使含氮物转化成

硫酸铵。假如强碱进行蒸馏使氨逸出，用硼酸吸收，再用酸滴定，测出氮含量，将结果乘以

换算系数6.25，计算出粗蛋白含量。

4试剂

4.1硫酸（GB625）：化学纯，含量为98%，无氮。

4.2混合催化剂：0.4g硫酸铜，5个结晶水（GB665），6g硫酸钾（HG3-920）或硫酸

钠（HG3-908），均为化学纯，磨碎混匀。

4.3氢氧化钠（GB629）：化学纯，40%水溶液（M/V）。

4.4硼酸（GB628）：化学纯，2%水溶液（M/V）。

4.5混合指示剂：甲基红（HG3-958）0.1%乙醇溶液，溴甲酚绿（HG3-1220）0.5乙醇溶

液，两溶液等体积混合，在阴凉处保存期为三个月。

4.6盐酸标准溶液：邻苯二甲酸氢钾法标定，按GB601制备。

4.6.10.1mol/L盐酸（HCl）标准溶液：8.3mL盐酸（GB622），分析纯，注入1000mL蒸

馏水中。

4.6.20.02mol/L盐酸（HCl）标准溶液：1.67mL盐酸（GB622），分析纯，注入1000mL

蒸馏水中。

4.7蔗糖（HG3-1001）：分析纯。

4.8硫酸铵（GB1396）：分析纯，干燥。

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4.9硼酸吸收液：1%硼酸水溶液1000mL，加入0.1%溴甲酚绿乙醇溶液10mL，0.1%甲基

红乙醇溶液7mL，4%氢氧化钠水溶液0.5mL，混合，置于阴凉处保存期为一个月（全自动

程序用）。

5仪器设备

5.1实验室用样品粉碎机或研钵。

5.2分样筛：孔径0.45mm（40目）。

5.3分析天平：感量0.0001g。

5.4消煮炉或电炉。

5.5滴定管：酸式，10、25mL。

5.6凯氏烧瓶：250mL。

5.7凯氏定氮装置：常量直接蒸馏式或半微量水蒸馏式。

5.8锥形瓶：150、250mL。

5.9容量瓶：100mL。

5.10消煮管：250mL。

5.11定氮仪：以凯氏原理制造的各类型半自动、全自动蛋白质测定仪。

6试样的选取和制备。

选取具有代表性的样品用四分法缩减至200g，粉碎后全部通过40目筛，装于密封容

器中，防止试样成分的变化。

7分析步骤

7.1仲裁法

7.1.1试样的消煮

称取试样0.5～1g（含氮量5~80mg）准确至0.0002g，放入凯氏烧瓶（5.6）中，加入

6.4g混合催化剂（5.4），与试样混合均匀，再加入12mL硫酸（4.1）和两粒玻璃珠，将凯

氏烧瓶（5.6）置于电炉（5.4）上加热，开始小火，待样品焦化，泡沫消失后，再加强火力

（360～410℃）直至呈透明的蓝绿色，然后再继续加热，至少2h。

7.1.2氨的蒸馏（蒸馏步骤的检验见附录)

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7.1.2.1常量蒸馏法

将试样消煮液（7.1.1）冷却，加入60～100mL蒸馏水，摇匀，冷却。将蒸馏装置（5.7）

的冷凝管末端浸入装有25mL硼酸（4.4）吸收液和2滴混合指示剂（4.5）的锥形瓶内。然

后小心地向凯氏烧瓶（5.6）中加入50mL氢氧化钠溶液（4.3），轻轻摇动凯氏烧瓶（5.6）

使溶液混匀后再加热蒸馏，直至流出液体体积为100mL。降下锥形瓶，使冷凝管末端离开

液面，继续蒸馏1～2min，并用蒸馏水冲洗冷凝管末端，洗液均需流入锥形瓶内，然后停止

蒸馏。

7.1.2.2半微量蒸馏法

将试样消煮液（7.1.1）冷却，加入20mL蒸馏水，转入100mL容量瓶中，冷却后用水

稀释至刻度，摇匀，作为试样分解液。将半微量蒸馏装置（5.7）的冷凝管末端浸入装有20mL

硼酸（4.4）吸收液和2滴混合指示剂（4.5）的锥形瓶（5.8）内。蒸汽发生器（5.7）的水