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第七章
动物细胞基因操作
.
动物细胞基因操作
n动物细胞基因操作的必须性:可进行细菌和真菌
细胞所无法进行的真正的翻译后修饰
n载体
1)非复制质粒载体
2)带有病毒复制子的质粒
3)病毒转导载体
n细胞：与细胞本身特性、载体、转移、应用相
关
n转移：转移技术、瞬时与稳定转染、共转染
n应用：细胞研究、蛋白表达、体内基因治疗、
转基因动物
.
第一节动物细胞DNA
转移技术
.
动物细胞基因转移的途径=转
基因技术
n直接DNA转移：外源DNA通过物理转化直
接进入细胞
如显微注射、DNA颗粒轰击、
n转染：化学转染技术、脂质体、电穿孔
n转导：通过动物病毒包裹，利用病毒可
以自然感染细胞并将自身核酸分子转入
细胞的能力。
.
转染技术
n化学转染技术(利用胞吞作用)
n1)DNA/磷酸钙共沉淀法
n适用于单层生长细胞，不适用于悬浮或成团生长的细胞
n对某些细胞有毒性，难以转染
n2)二乙氨乙基葡聚糖(DEAE-dextran)
n可溶性聚阳离子制剂，不能用于形成稳定的细胞系
n脂质体(利用胞吞作用)
n低毒性，易操作，效率高，适用细胞类型多，甚至可转
染活体细胞
n电穿孔(利用电脉冲在细胞膜上形成瞬时的纳米大小的孔〕
.
转移后DNA的命运
n具备在宿主细胞内发挥功能的复制起始子，
可以稳定复制(稳定转染)
n可以整合到基因组DNA上，稳定复制(稳定
转染)
n不具备在宿主细胞内发挥功能，也没有整
合到基因组DNA上，瞬时保存(瞬时转染〕
nDNA转入细胞的效率远高于DNA整合的效率
n两个物理上不相连的基因可以发生共转染，
甚至可以都整合到基因组DNA上
.
第二节
动物细胞载体
.
动物细胞载体
n非复制型载体
瞬时转染的载体(启动子功能分析的载体)
选择标记DNA
n带有病毒复制子的质粒
SV40、BPV、EBV
n病毒转导载体
腺病毒、杆状病毒、牛痘病毒、Lentivirus等
.
瞬时转染的非复制型载体
n载体无法复制，也不
整合于基因组上
n在宿主细胞中往往只
能保持1-2d的稳定
n可以进行基因的表达
n载体上往往具有报告
基因，能够报告表达
的发生
.
启动子功能分析与报告基因
.
选择标记基因
转染实验
TK胸苷激酶
n未经克隆的含
TK基因的外源
DNA使一些摄
入细胞具有了
在选择培养基
上生存的能力，
这样的基因称
为选择性标记
基因
.
核苷酸从头合成和补救途径：编码补
救途径的酶的基因(Hprt,Tk)可以用
作选择标记
.
共转化与选择标记
n两个物理上不相连的基因
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