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实验二饲料粗蛋白的测定

一、实验目的

通过饲料样品中粗蛋白质的测定，让学生了解了解凯氏定氮法测定的基本原理，掌握半

微量凯氏定氮法测定饲料粗蛋白质的方法，掌握粗蛋白质含量的计算方法。

二、实验原理

各种饲料的有机物质在还原性催化剂(如CuSO，KSO或NaSO或Se粉)的帮助下，

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用浓硫酸进行消化作用，使蛋白质和其它有机态氮（在一定处理下也包括硝酸态氨）都转变

成NH+并与HSO化合成（NH）SO，而非含氮物质，则以CO↑，HO↑，SO↑状

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态逸出。消化液在浓碱的作用下进行蒸馏，释放出的铵态氮，用硼酸溶液吸收之并与之结合

成为四硼酸铵，然后以甲基红溴甲酚绿作指示剂，用HCl标准溶液（0.1mol/L）滴定，求

出氮的含量，根据不同的饲料再乘以一定的系数（通常用6.25系数计算），即为粗蛋白质的

含量。

其主要化学反应如下：

1、2NH（CH）COOH+13HSO→（NH）SO+6CO+12SO+16H（丙氨酸）

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2、（NH）SO+2NaOH→2NH+3HO+2NaSO

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3、4HBO+NH→NHHBO+5HO

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4、NHHBO+HCl+5HO→NHC1+4HBO

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本法不能区别蛋白氮和非蛋白氮，只能部分回收硝酸盐和亚硝酸盐等含氮化合物。在测

定结果中除蛋白质外，还有氨基酸、酰胺，铵盐和部分硝酸盐、亚硝酸盐等，故以粗蛋白质

表示之。

三、实验设备

1、实验室用样品粉碎机或研钵；

2、分析筛：孔径0.45mm(40目)；

3、分析天平：感量0.0001g；

4、消煮炉或电炉；

5、滴定管：酸式，25或50ml；

6、凯式烧瓶：100或500m1；

7、凯氏蔗馏装置：常量直接蒸馏式或半微量水蒸气蒸馏式；

8、锥形瓶，150或250m1；

9、容量瓶：100ml。

三、实验内容

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1、称取0.5～1g试样（含氮量5～80mg）准确至0.0002g，无损失地放入凯氏烧瓶中，

加入硫酸铜0.9g，无水硫酸钾（或硫酸钠）15g，与试样混合均匀，再加硫酸25ml和2粒

玻璃珠，在消煮炉士小心加热，待样品焦化，泡沫消失，再加强火力（360～410℃）直至溶

液澄清后，再加热消化15min。

2、氨的蒸馏

（1）常量直接茂馏法将上述的试样消煮液冷却，加蒸馏水200ml，摇匀，冷却。沿

瓶壁小心加入40％氢氧化钠溶液100ml，立即与蒸馏装置相连．蒸馏装置冷凝管的末端应浸

入50ml硼酸吸收液lcm。加混合指示剂2