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黄豆芽的蛋白质含量测定

(考马斯亮蓝G-250比色法)

一、实验目的

1、了解考马斯亮蓝法测定蛋白质含量的原理，掌握其测定方法。

2、熟练掌握分光光度计的使用技术。

二、实验原理

考马斯亮蓝G-250是一种染料，在游离状态下呈红色，当它与蛋白质结合后变为蓝色，

该结合物在595nm波长下有最大光吸收。在一定的蛋白质浓度范围内(0～1000μg/mL)，其吸

光度与蛋白质含量成正比，故可用于可溶性蛋白质的定量测定。

三、仪器、试剂和材料

1、仪器设备

分析天平、10mL塑料离心管、5mL移液管、研钵、量筒、50mL离心管、10mL容量瓶、

离心机、722型分光光度计

2、试剂

（1）标准蛋白质原液：称取100mg牛血清白蛋白，溶于蒸馏水并定容至100mL，即为

1mg/mL的标准蛋白质原液。

（2）考马斯亮蓝G-250试剂：称取100mg考马斯亮蓝G-250，溶于50mL95%乙醇中，加入

85%（m/v）的磷酸100mL，最后用蒸馏水定容到1000mL。此溶液在常温下可放置一个月。

3、材料：黄豆芽

四、操作步骤

（一）黄豆芽蛋白质样品的制备

1、准确称取新鲜黄豆芽下胚轴2g，放入研钵中，加入2mL蒸馏水研成匀浆，转移至50mL离

心管中，再用6mL蒸馏水充分洗涤研钵，洗涤液收集于同一量筒中，定容至10ml,混匀；

2、冰浴中放置10-20min以充分提取；

3、从量筒中取1ml至离心管，12000rpm离心5min，将上清液倒入10mL量筒，以蒸馏水定容

至10mL，即得黄豆芽蛋白质样品溶液。

（二）标准曲线制作

2、高浓度标准曲线的制作（0～1000μg/mL）

取6支1.5mL的离心管，按表1.2加入试剂，配制不同浓度的蛋白质标准液

试管号012345

1mg/mL的标准蛋00.20.40.60.81.0

白质原液(mL)

蒸馏水(mL)1.00.80.60.40.20

蛋白质含量(μg)02004006008001000

OD00.1960.3460.4870.6020.781

595nm

另取6支10mL的离心管，编号标记，从上述各管中分别吸取0.1mL溶液，加入5mL考

马斯亮蓝G-250试剂，盖上离心管盖子，充分混匀，放置3min后在595nm波长下比色测

定（比色应在lh内完成），记录各管测定的光密度值OD595nm。以牛血清白蛋白含量（μg）

为横坐标，以吸光度为纵坐标，制作蛋白质浓度为0～1000μg/mL的标准曲线如下：

高浓度标准曲线

y=0.0008x

0.9

0.80.781

0.7

）

m0.60.602

n

5

90.50.487吸光度

5

（

0.4线性(吸光度)

度

光0.30.346

吸

0.20.196

0.1