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切断的DNA片段要与受体细胞的
DNA连接,你觉得可以用什么酶?
2.基因的针线──DNA连接酶
阅读思考:
DNA聚合酶和DNA连接酶有何
相同和不同点?
.
作用:将双链DNA片段缝合起来恢复被限制酶切开
的两个核苷酸之间的磷酸二酯键
种类:E.coliDNA连接酶:来源与大肠杆菌
TDNA连接酶:来源与T4噬菌体
4
差异:E.coliDNA连接酶只能将双链DNA片段互补的黏性末端之间连接起来,不
能将双链DNA片段平末端之间进行连接;T4DNA连接酶既可“缝合〞双链DNA
片段互补的黏性末端,又可“缝合〞双链DNA片段的平末端,但连接平末端之间
的效率比较低.
.
.
想一想:DNA连接酶与DNA聚合酶是
一回事吗?为什么?
DNA连接酶DNA聚合酶
连接DNA链双链单链
作用用于基因的表达载DNA扩增复制
体的构建
在两DNA片段之间将单个核苷酸加
形成磷酸二酯键到已存在的核酸
连接部位片段的3’末端的
羟基上,形成磷
酸二酯键
.
答:不是一回事。DNA连接酶和DNA聚合酶都是形成磷酸二酯键〔在
相邻核苷酸的3位碳原子上的羟基与5位碳原子上所连磷酸基团的羟
基之间形成〕,那么,二者的差异主要表现在什么地方呢?
〔1〕DNA聚合酶只能将单个核苷酸加到已有的核酸片段的3′末端
的羟基上,形成磷酸二酯键;而DNA连接酶是在两个DNA片段之间形
成磷酸二酯键,不是在单个核苷酸与DNA片段之间形成磷酸二酯键。
〔2〕DNA聚合酶是以一条DNA链为模板,将单个核苷酸通过磷酸二
酯键形成一条与模板链互补的DNA链;而DNA连接酶是将DNA双链上
的两个缺口同时连接起来。因此DNA连接酶不需要模板。
此外,二者虽然都是由蛋白质构成的酶,但组成和性质各不相同。
.
稳固练习
限制酶在DNA的任何部位都能将DNA切开吗?以下是四种不
同限制酶切割形成的DNA片段:
(1)…CTGCA
(2)…AC
(3)GC…
…G
…TG
CG…〔4〕…G
(5)
G…
(6)…GC
…CTTAA
ACGTC…
…CG
(7)GT…
(8)AATTC…
CA…
G…
总结规律
你是否能用DNA连接酶将它们连接起来?
限制酶所识别的序列有什么特点?
无论是6个碱基还是4个碱基,都可以找到一条中心轴线,中
轴线两侧的双链DNA上的碱基是反向对称重复排列的。.
3基因进入受体细胞的载体“分子运输车〞
1;作用;
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