线虫的分类鉴定.ppt

*（4）RAPD技术随机扩增的多态性DNA，RAPD技术建立于PCR技术基础上,它是利用一系列(通常数百个)不同的随机排列碱基顺序的寡聚核苷酸单链(通常为10聚体)为引物,对所研究基因组DNA进行PCR扩增.聚丙烯酰胺或琼脂糖电泳分离,经EB染色或放射性自显影来检测扩增产物DNA片段的多态性,这些扩增产物DNA片段的多态性反映了基因组相应区域的DNA多态性。第30页,共38页，星期六，2024年，5月*植物线虫的其他鉴定方法M.incognitaM.javanicaM.arenariaRAPD-PCR鉴定根结线虫第31页,共38页，星期六，2024年，5月*应用实例第32页,共38页，星期六，2024年，5月*（5）SSR-PCR技术由于真核生物中富含CA重复序列，SSR－PCR就是针对高度密集的CA微卫星体简单重复序列，设计与之互补的重复CA碱基作引物扩增其重复片段，从而揭示其多态性。第33页,共38页，星期六，2024年，5月*（6）分子杂交技术核酸的分子杂交(molecularhybridization)技术是目前生物化学和分子生物学研究中应用最广泛的技术之一，是定性或定量检测特异RNA或DNA序列片段的有力工具。它是利用核酸分子的碱基互补原则而发展起来的。在碱性环境中加热或加入变性剂等条件下，双链DNA之间的氢键被破坏(变性)，双链解开成两条单链。这时加入异源的DNA或RNA(单链)并在一定离子强度和温度下保温(复性)，若异源DNA或RNA之间的某些区域有互补的碱基序列，则在复性时可形成杂交的核酸分子。第34页,共38页，星期六，2024年，5月*在进行分子杂交技术时，要用一种预先分离纯化的已知RNA或DNA序列片段去检测未知的核酸样品。作为检测工具用的已知RNA或DNA序列片段称为杂交探针(probe)。它常常用放射性同位素来标记。第35页,共38页，星期六，2024年，5月*三、植物线虫的分类地位和分类系统概述线虫是一类两侧对称原体腔无脊椎动物，其归属于动物界中的一个门—线虫门，根据侧尾腺的有无划分为2个纲：侧尾腺纲和无侧尾腺纲。目前世界上已记载的植物线虫约有200多属5000余种，其中大多数隶属于侧尾腺纲，少数隶属于无侧尾腺纲。在上述系统中，植物寄生线虫或植物根际线虫主要是垫刃亚目、滑刃亚目、长针科和毛刺科线虫，其他亚目或科中的线虫，只有极少数与植物有关，而大多数是自由生活线虫或昆虫寄生线虫，所以，目前植物线虫总的可以概括为这4大类。第36页,共38页，星期六，2024年，5月*植物线虫的分类地位和分类系统概述线虫门侧尾腺口纲无侧尾腺口纲垫刃目滑刃目矛线目三矛目垫刃科粒线虫科锥线虫科刺线虫科短体线虫科纽带线虫科异皮线虫科滑刃科拟滑刃科长尾滑刃科针咽科长针科毛刺科第37页,共38页，星期六，2024年，5月感谢大家观看第38页,共38页，星期六，2024年，5月**PCR技术基本原理PCR技术的基本原理类似于DNA的天然复制过程，其特异性依赖于与靶序列两端互补的寡核苷酸引物。PCR由变性--退火--延伸三个基本反应步骤构成：①模板DNA的变性：模板DNA经加热至93℃左右一定时间后，使模板DNA双链或经PCR扩增形成的双链DNA解离，使之成为单链，以便它与引物结合，为下轮反应作准备；②模板DNA与引物的退火(复性)：模板DNA经加热变性成单链后，温度降至55℃左右，引物与模板DNA单链的互补序列配对结合；③引物的延伸：DNA模板--引物结合物在TaqDNA聚合酶的作用下，以dNTP为反应原料，靶序列为模板，按碱基配对与半保留复制原理，合成一条新的与模板DNA链互补的半保留复制链。重复循环变性--退火--延伸三过程，就可获得更多的“半保留复制链”，而且这种新链又可成为下次循环的模板。每完成一个循环需2～4分钟，2～3小时就能将待扩目的基因扩增放大几百万倍。到达平台期所需循环次数取决于样品中模板的拷贝。**RAPD技术建立于PCR技术基础上,它是利用一系列(通常数百个)不同的随机排列碱基顺序的寡聚核苷酸单链(通常为10聚体)为引物,对所研究基因组DNA进行PCR扩增.聚丙烯酰胺或琼脂糖电泳分离,经EB染色或放射性自显影来检测扩增产物DNA片段的多态性,这些扩增产物DNA片段的多态性反映了基因组相应区域的DNA多态性。RAPD所用的一系列引物DNA序列各不相同,但对于任一特异的引物,它同基因组DNA序列有其特异的结合位点.这些特异的结合位点在基因组某些区域内的分布如符合PCR扩增反应的条件,即引物在模板的两条链上有互补位置,且引物3端相距在一定