噬菌体效价的测定在菌苔上逐步形成的噬菌体群体由于其.pdfVIP

2.噬菌体效价的测定

在菌苔上逐步形成的噬菌体群体，由于其侵蚀宿主细胞的

结果，会使菌苔上出现一个个噬菌斑。因每种噬菌体的噬菌斑

有一定的形状、大小、边缘和透明度，故可用作鉴定的指标，

也可利用噬菌斑进行纯种别离和计数。这种情况甚像利用菌落

可进行有关微生物的别离、计数和鉴定那样。所不同的是噬菌

体只形成“负菌落〞。据测定，一个直径仅为2mm的噬菌斑，其

中噬菌体粒子的数目即高达107~109个。.

效价(titre，titer)这一名词在不同的场合有其不同的含义。

在这里，效价表示每毫升试样中所含有的侵染性的噬菌体粒子

数，也即噬菌斑形成单位(pfu，plaque-formingunit)数或感染

中心(infectivecentre)数。

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由于试祥中一般噬菌体粒子含量较高，故应先对

试样进行梯级稀释，然后再选用适宜的方法〔见以下

表解)测定其效价。

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〔1〕双层平板法

是一种被普遍采用并能精确测定效价的方法。预先分别配制

含2%和1%琼脂的底层培养基和上层培养基。先用前者在培养

皿上浇一层平板，再在后者(须先融化并冷却到45℃以下)中参加

较浓的对数期敏感菌和一定体积的待测噬菌体样品，于试管中

充分混匀后，立即倒在底层平板上铺平待凝，然后保温。一般

经十余小时后即可进行噬菌斑计数。现把双层平板法简括如下:

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双层平板法主要有以下几个优点；①加了底层培

养基后，可使原来底面不平的玻璃皿的缺陷得到了弥

补；②所形成全部噬菌体斑都接近处于同一平面上，

因此不仅每一噬菌斑的大小接近、边缘清晰，而且不

致发生上下噬菌斑的重叠现象(以下图)；③因上层培

养基中琼脂较稀，故形成的噬菌斑较大，更有利于计

数。

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〔2〕单层平板法

在上述双层平板中省略底层，但所用培养基的浓度

和所加的量均比双层平板法的上层为高和多。此法虽较

简便，但其实验效果较差。

〔3〕玻片快速法

将噬菌体和敏感的宿主细胞与适量的琼脂培养基

(0.5~0.8%琼脂，事前融化)充分混合。涂布在无菌载

片上，经短期培养后，即可在低倍显微镜或放大镜下计

数。例如，用于金黄色葡萄球菌噬菌体的效价测定，仅

需2.5~4.0小时即可，唯精确度较差。

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(4)斑点试验法

这是一种半定量的预试验方法。先将敏感的宿主菌浓

悬液涂布于适宜的培养基平板上，然后使平板外表朝下，

在45℃左右的温箱中使平板外表不留水膜。再把不同稀释

度待测试样依次用接种环点种在上述平板上。保温数小时

后，根据点样处是否产生噬菌斑即可初步判断该试样的效

价。

(5)液体稀释管法

与用于细菌活菌计数中的系列稀释法相似。不同处是：

①各试管中均加有培养液；②各管中均须接入处于对数期

的宿主细胞；③以不长菌的最高稀释管来计算效价。

成斑率精选ppt

3.一步生长曲线

一步生长曲线：定

量描述烈性噬菌体生长效

价

规律的实验曲线称为一

步生长曲线。潜伏期，

裂解期，平稳期。

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(1)潜伏期

指噬菌体的核酸侵入宿主细胞后至第一个噬菌体粒子

装配前的一段时间，故整段潜伏期中没有一个成熟的噬菌

体粒子从细胞中释放出来。潜伏期又可分两段：①隐晦期

(eclipsephase〕，指在潜伏期前期人为地(用氯仿)裂解细胞，

裂解液仍无侵染性的一段时间。②胞内累积期(intracellular

accumulationphase)，又称潜伏后期。指在隐晦期后，如

人为地裂解细胞，其裂