实验血液学技术课考题汇.pdfVIP

多克隆位点（multiplecloningsite,MCS），是包含多个（最多20个）限制性酶切位

点（restrictionsite）的一段很短的序列。也称为多位点接头（polylinker），是

工程中常用到的载体质粒的标准配置序列。MCS中，每个限制性酶切位点通常

是唯一的，即它们在一个特定的载体质粒中只出现一次。

限制性内切酶的星号活性（*）又叫第二，指限制酶在一定的因素

的作用下识别的特异性降低的现象。星号活性的出现会导致酶切位点

的增多，片段增加。星号活性的引起与多种因素有关系，如，甘油浓

度过高（达到12%-20%），其他有机试剂的存在，pH值或离子强度

不适合，酶浓度过高，做实验的时候加酶量一般不超过反应体系的1

0%。如EcoRI,识别的序列为GAATTC，而EcoRI*仅识别AATT。另

外星号活性的出现与酶本身有关，有的酶容易出现星号活性如EcoR

I，有的酶不容易出现。

什么是感受态细胞处于能够吸收的状态称感受态，处于感受态的细胞称作感

受态细胞。

受体细胞经过一些特殊方法（如：CaCl2，RuCl等化学试剂法）的处理后，细胞

膜的通透性发生变化，成为能容许多有外源的载体分子通过的感受态细胞。

什么是“α互补”：

现在使用的一些载体（如pUC系列），含有

β-半乳糖苷酶（LacZ）调控序列和N

146个氨基酸端的编码信息，并在这个区域

多克隆位点，使几个氨基酸该

的氨基端，这种不影响其功能。一些受

体细菌表达突变的LacZ，仅编码C端

部分蛋白。LacZ的N端和C端片段单

独没有酶活性，但二者结合在一起可以互补，

形成有酶活性的蛋白质，这种互补现象称α

-互补。

分子克隆载体都具备了以下3个最基本的结构：

1）至少有一个起点，因而至少可在一种生物体中自主；

2）至少应有一个克隆位点，以供外源；

3）至少应有一个遗传标记，以指示载体或重组分子是否进入宿主细胞。

什么是质粒:

一些双链、闭合环状分子，独立于细

和转录，大小范围从1到200Kb。

质粒不相容性

利用同一个系统的不同质粒不能稳定和平地共处，成为不相容质粒。