微生物育种8 高通量筛选.pptVIP

*三、酶标仪光度检测可见光紫外光区荧光多通道恒温*四、多通道移液器间距符合微孔板尺寸*五、连续移液器一次性吸取较大量液体，每次释放小量等体积液体*五、全自动移液工作站自动化，无人值守；根据指令进行；具有清洗、温控、条码识别、磁力搅拌等装置*六、自动菌落挑取仪彩色CCD菌落识别；自动开盖、关盖、传送自动挑选至微孔板*七、流式细胞仪细胞自动分析和分选；分选指定细胞亚群根据荧光信号*八、数据分析软件SAS:统计分析的标准软件数据访问、数据管理、数据呈现、数据分析；SPSS:操作简单，无需编程模块化，方便灵活EXCEL:最流行的数据处理软件，实现常规分析。*第二节高通量筛选技术中的常用方法微孔板使用和光学检测法工程菌菌体裂解报告基因流式细胞术蛋白质芯片*一、微孔板的使用和光学检测法微孔板可用于培养细胞；光学检测基于光学信号强度与带筛选物质特性的函数关系*二、工程菌菌体裂解靶蛋白——微生物宿主细胞中表达菌体自裂解表达系统环境因素诱导（温度、UV照射）*三、报告基因报告基因：一种编码可被检测的蛋白质或者酶的基因。利用报告基因的表达产物判断目的基因的表达与否以及表达量的大小。常用：GFP、lacZ、CAT（氯霉素乙酰转移酶）、luc（荧光素酶）、SEAP（碱性磷酸酯酶）、GUS（β-葡萄糖醛酸酶）*（1）绿色荧光蛋白（GFP）来自Aequoreavictoria水母吸收光谱最大峰值为395nm(紫外)，副峰峰值为470nm(蓝光)发射光谱最大峰值为509nm(绿光)，侧峰峰值为540nm。分子质量较小的蛋白，易与其他一些目的基因形成融合蛋白，且不影响自身和自的基因产物的空间构象和功能；与目的基因融合，将目的基因标记为绿色，即可定量分析目的基因的表达水平。*（2）β-半乳糖苷酶（lacZ）催化乳糖水解得到半乳糖；非常稳定；对蛋白水解作用抗性强/且容易测试；可将邻硝基苯酚-β-D-半乳糖苷（ONPG）水解成无色的半乳糖和亮黄色的邻硝基酚（ONP）；*（3）表面展示技术噬菌体表面展示技术；细菌表面展示技术；酵母表面展示技术*1.噬菌体展示技术改造过的噬菌体；目的基因整合到噬菌体基因组；外源蛋白以融合蛋白的形式与噬菌体表面蛋白共同表达与噬菌体表面；利用亲和作用筛选；缺点：蛋白大小受限制**************************挑战：文库容量巨大，筛选效率不高核心思想：合适的筛选模型——将目的样品特性转化为传感器可识别的信号；自动化操作设备——多通道操作，可使用通用型耗材*第一节常用仪器设备工欲善其事，必先利其器。高效率、自动化*一、微孔板96、384、……、1536、3456孔规格统一*二、微孔板恒温振荡培养器微生物微量培养*************************