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细胞转染的最全知识介绍，收藏这一篇就够了······

定义：细胞转染是指将外源分子如DNA，RNA等导入真核细胞的

技术。

应用：在研究基因功能、调控基因表达、突变分析和蛋白质生产

等生物学试验中。

简介：转染，是将外源性基因导入细胞内的一种专门技术。随着

基因与蛋白功能研究的深入，转染目前已成为实验室工作中经常涉及

的基本方法。

一、转染的途径大致可分为物理介导、化学介导和生物介导三类：

1.物理介导：电穿孔法、显微注射和基因枪属于通过物理方法将

基因导入细胞的范例。

2.化学介导：方法很多，如经典的磷酸钙共沉淀法、脂质体转染

方法、和多种阳离子物质介导的技术。

3.生物介导：方法有较为原始的原生质体转染，和现在比较多见

的各种病毒介导的转染技术。

理想细胞转染方法，应该具有转染效率高、细胞毒性小等优点。

病毒介导的转染技术，是目前转染效率最高的方法，同时具有细胞毒

性很低的优势。但是，病毒转染方法的准备程序复杂，常常对细胞类

型有很强的选择性，在一般实验室中很难普及。其它物理和化学介导

的转染方法，则各有其特点。

需要指出的一点，无论采用哪种转染技术，要获得最优的转染结

果，可能都需要对转染条件进行优化。影响转染效率的因素很多，从

细胞类型、细胞培养条件和细胞生长状态，到转染方法的操作细节，

都需要考虑。

二、常规转染技术：

1.瞬时转染（transienttransfection）：外源DNA/RNA不整合

到宿主染色体中，因此一个宿主细胞中可存在多个拷贝数，产生高水

平表达，但通常只持续几天，多用于启动子和其他调控元件的分析。

一般来说，超螺旋质粒DNA转染效率较高，在转染后24~72h小时内

（依赖于各种不同的构建）分析结果，常常用到一些报告系统和荧光

蛋白，β半乳糖苷酶等来帮助检测。

2.稳定转染（Stabletransfected）：外源DNA既可以整合到宿

主细胞中，也可能作为一种游离体（episome）存在。尽管线性DNA

比超螺旋DNA转入量低但整合率高。外源DNA整合到染色体中概率

很小，大约1/104转染细胞能整合，通常需要通过一些选择性标记。

如来氨丙基转移酶（APH；新霉素抗性基因），潮霉素磷酸转移酶

（HPH），胸苷激酶（TK）等反复筛选，得到稳定转染的同源细胞系。

瞬时转染和稳定转染的比较

瞬转稳转

导入的DNA没有整合到基因组中，而是

导入的DNA整合到基因组中

保留在细胞核上

导入的遗传物质不传递到子代，遗传导入的遗传物质能够代代相传；遗传

改变只是暂时的改变是永久的

不需要选择性筛选需要选择性筛选出稳定转染的细胞

只有DNA载体可用于稳定转染，RNA本

DNA载体和RNA都可用于瞬时转染

身不能稳定地导入细胞中

导入的遗传物质的高拷贝数导致高水平单拷贝数或低拷贝数的稳定整合的DNA

的蛋白质表达。导致较低水平的蛋白质表达。

需要2-3周的时间筛选出稳定转染的细

通常在转染后24-96小时内收获细胞。

胞克隆。

通常不适合使用具有诱导型启动子的载适用于使用带有诱导型启动子的载体

体的研究。的研究。

三、转染方式

细胞由带负电荷的磷脂双分子层构成，这对大分子物质来说是个

不可透过的屏障，比如DNA和RNA的磷酸骨架