人类免疫缺陷病毒（HIV） 检测.pptxVIP

人类免疫缺陷病毒（HIV）检测;

人类免疫缺陷病毒（HIV）是引起人类艾滋病（获得性免疫缺陷综合征，AIDS）的病原体。;

1.方法;有检测HIV抗原和检测HIV抗体两种。前者可用组织细胞培养法、核酸检测法及免疫酶标法；后者有凝集试验、免疫荧光试验、蛋白印迹试验及放射免疫试验和免疫酶标技术等。

目前世界上常用酶联免疫吸附试验（ELISA）间接法作为经典筛选试验，蛋白印迹试验作为确证试验。;

（1）ELISA间接法检测HIV抗体：将待测的血清稀释后按HIV酶标诊断试剂盒的说明进行操作；该法的特异性和敏感性强，操作简单、快速安全，比较适合大批量标本和筛选实验，但对HIV感染初期病人不能检测到抗体是其不足之处。;

（2）蛋白印迹试验：ELISA法确诊的阳性标本应做蛋白印迹试验以确证。;

①用十二烷基磺酸钠（SDS）将纯化后的HIV完整分子裂解为许多特定的片段（方法为1%SDS100℃水溶10min），经过聚丙烯酰胺凝胶电泳，使分子量不同的多肽片段由上至下因电泳的速度不同而分离。

②再经一次由后向前的电泳，使多肽片段在原位转移到硝基纤维素膜上（印迹）。

③用小牛血清白蛋白封闭硝基纤维素膜后，再将其切成所需大小的细条，放于4℃保存备用。;

④检测时，先将硝基纤维素膜细条恢复室温，再与待检血清（用稀释液稀释后）共同浸泡，37℃孵育60min（需用振荡摇床）。

⑤取出硝基纤维素膜细条，用洗涤液洗涤5次，每次5min（用振荡摇床）。

⑥加酶标记抗人IgG抗体，于37℃孵育60min（需用振荡摇床）。

⑦洗涤同⑤。

⑧加酶底物，显色10～20min。终止反应（放置于室温观察）。;

2.结果判断;

（1）ELISA间接法检测HIV抗体：用酶标测定仪测OD值或用肉眼根据底物颜色深浅观察判断结果。使用OD值判读结果可根据以下两种方法进行计算。

①以X值＜1.5为阴性；X值≥1.5而＜2.0为可疑；X值≥2.0为阳性。

（X值=标本OD值-空白对照OD值/阴性对照OD值-空白对照OD值）

②以标本的OD值＞阴性对照的平均OD值加2个标准差为阳性结果的阈值判读。;

（2）蛋白印迹试验：AIDS病人血清中的抗HIV抗体与HIV的多肽片段（外膜蛋白与核心蛋白）特异性结合后可形成多条蛋白区带。强阳性反应显示HIV几个基因组编码的全部蛋白带，弱阳性反应显示两条或几条显色较弱的蛋白带，阴性反应则无任何蛋白带显示。;

3.注意事项

（1）使用公认的HIV酶标诊断试剂盒，不同厂家的试剂盒有可能操作有异，应严格按说明书操作；不同厂家的产品有不同的阳性判断标准，应按说明书慎重判断。

（2）鉴于HIV及有关试验过程的特殊危险性，应严格规范实验室操作规程，增加试验结果的准确性；严格规范安全防范措施，防止感染；阳性结果应重复试验。;

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