水稻稻瘟病菌抗药性风险评估技术规范.docx

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水稻稻瘟病菌抗药性风险评估技术规范

1范围

本文件规定了水稻稻瘟病菌抗药性风险评估技术规范，包括病原菌的分离、敏感性测定、抗药性风险评估、抗性风险管理等。本文件适用于水稻稻瘟病菌抗药性风险评价。

2规范性引用文件

下列文件中的内容通过文中的规范性引用而构成本文件必不可少的条款。其中，注日期的引用文件，仅该日期对应的版本适用于本文件；不注日期的引用文件，其必威体育精装版版本（包括所有的修改单）适用于本文件。

NY/T1156.1-2006农药室内生物测定试验准则杀菌剂第1部分：抑制病原真菌孢子萌发试验凹玻片法

NY/T1156.2-2006农药室内生物测定试验准则杀菌剂第2部分：抑制病原真菌菌丝生长试验平皿法

NY/T1859.6-2014农药抗性风险评估第6部分：灰霉病菌抗药性风险评估

NY/T3257-2018水稻稻瘟病抗性室内离体叶片鉴定技术规程

3术语和定义

下列术语和定义适用于本文件。

3.1稻瘟病菌fungiofriceblast

引起水稻稻瘟病的丝状真菌稻瘟病菌，有性态为Magnaportheoryzae，无性态为Pyriculariaoryzae。

3.2敏感性基线sensitivebaseline

通过生物测定方法得到的有害生物敏感品系（或株系或生物型）对药剂的剂量反应曲线。

3.3敏感菌株sensitivestrain

在未接触过某种药剂的地区采集或在室内多代隔离培养获得的菌株，即为该药剂的敏感菌株。

3.4抗性菌株resistancestrain

指长期施用杀菌剂，出现对某种药物反应敏感性降低的病原菌，即为对该药剂的抗性菌株。

3.5药剂驯化fungicideadaption

用杀菌药剂连续对稻瘟病菌处理，使其对杀菌剂的耐受能力发生改变的过程。

3.6紫外诱变UV-mutagenesis

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用紫外线照射稻瘟病菌菌丝或者孢子，使其发生与抗药性相关的突变。

3.7抗性突变体resistantmutant

病原菌经过杀菌药剂或者紫外线处理后，对药剂敏感性发生改变的菌株。

3.8抗性指数resistancefactor

抗性菌株对该药剂的敏感性与其亲本菌株敏感性或与敏感基线的平均EC50的比值。

3.9交互抗药性cross-resistance

稻瘟病菌由于相同的抗药性机制，对靶标药剂以外的其它杀菌剂产生的抗药性。

4试验方法

4.1病原菌的分离

于水稻分蘖末期采集稻瘟病病样，病原菌的分离按照NY/T3257-2018执行。

4.2敏感性测定

4.2.1药剂配制

将有效含量90%以上的药剂原药使用合适的溶剂进行溶解稀释，配制成1×104μg/mL的母液，现配现用，溶剂的最终含量不超2%。

4.2.2药剂浓度梯度设置

药剂可配置5~7个浓度，浓度梯度应呈等比递进关系。浓度设置理论上应使最低浓度对病原菌的抑制率在15%左右，最高浓度对病原菌的抑制率在85%左右。

4.2.3测定方法

4.2.3.1菌丝生长速率测定法

本方法适用于作用机制为抑制菌丝生长的药剂。将分离的稻瘟病菌接种至含不同浓度的含药培养基上，同时设置不含药培养基作为空白对照，28℃黑暗培养8天，采用十字交叉法测量菌落直径，并计算抑菌率。具体步骤参照NY/T1156.2-2006执行。

4.2.3.2孢子萌发测定法

本方法适用于作用机制为抑制孢子萌发的药剂。使用番茄燕麦培养基制备稻瘟病菌孢子，并使用无菌水将浓度调节至105个/mL孢子悬浮液，吸取100μL孢子悬浮液均匀涂布在含有不同药剂浓度的水琼脂培养基平板上，28oC下光暗交替培养8~12h（空白对照孢子萌发95%时），显微镜下检查孢子的萌发率（芽管长度达孢子宽度的1/2视为萌发）。具体步骤参照NY/T1156.1-2006执行。

4.2.4敏感性基线确定

在未使用过待评估药剂及与其相同作用机制药剂的多个代表性地区采集供试稻瘟病菌（50~100株）。按照NY/T1156.1~1156.2-2006中的方法测定其对该药剂的敏感性（EC50值）。供试菌株的敏感性分布频率中的正态分布单峰内的药剂敏感性（EC50值）平均值可作为稻瘟病菌对该药剂的敏感性基线。

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5抗药性风险评估

5.1药剂

持效期长、作用位点单一、与已知具有高风险药剂抗性机制相同的药剂普遍具有较高抗性风险。

5.2交互抗性

当测定到抗性菌株时，则进一步测定其对其它杀菌剂的交互抗性。具体按照NY/T1859.6-2014执行。若与其它药剂有交互抗性，则一定程度上加大了抗性风险。

5.3抗性