食品中毒黄素和米酵菌酸含量测定 高效液相色谱法.docx

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食品中毒黄素和米酵菌酸含量测定高效液相色谱法

1范围

本标准规定了食品中毒黄素和米酵菌酸的高效液相色谱测定方法。

本标准适用于食品中毒黄素和米酵菌酸的测定。

本标准中毒黄素的检出限为0.1μg/mL，定量限为0.3μg/mL；米酵菌酸的检出限为0.1μg/mL，定量限为0.3μg/mL。

2规范性引用文件

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GB/T6682-2008分析实验室用水规格和试验方法

3术语和定义

本文件没有需要界定的术语和定义。

4缩略语

下列缩略语适用于本文件。

QuEChERS：一种用于农产品检测的快速样品前处理技术（Quick、Easy、Cheap、Effective、Rugged、Safe）

5原理

试样用80%甲醇超声萃取，提取液经QuEChERS净化处理，经液相色谱分离后，在波长258nm测定，外标法定量。

6仪器与设备

6.1高效液相色谱仪：带二极管阵列检测器。

6.2天平：感量为0.01g和0.01mg。

6.3离心机：转速≥5000r/min。

6.4氮吹仪。

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6.5涡旋混合器。

6.6超声波振荡器。

6.7微孔有机过滤膜（孔径0.45μm）。

6.8恒温水浴锅。

7试剂与材料

除非另有规定，本方法所用试剂均为分析纯。实验用水应符合GB/T6682-2008中一级水要求。

7.1甲醇(CH3OH)：色谱纯。

7.2甲酸（HCOOH）。

7.3毒黄素（C7H7N5O2，CAS号：84-82-2）：纯度≥98%，或经国家认证并授予标准物质证书的标准物质。

7.4米酵菌酸（C28H38O7，CAS号：11076-19-0）：纯度≥95%，或经国家认证并授予标准物质证书的标准物质。

7.5增强型脂质去除净化管(QuEChERSdSPEEMR-Lipid)。

7.6标准储备溶液：

7.6.1米酵菌酸标准储备液(0.1μg/mL)：准确称取米酵菌酸标准品10mg(精确至0.01mg)，用甲醇溶解，转移至100mL容量瓶中，用甲醇定容。

7.6.2毒黄素标准储备液(0.1μg/mL)：准确称取毒黄素标准品10mg(精确至0.01mg)，用甲醇溶解，转移至100mL容量瓶中，用甲醇定容。

7.6.3标准系列工作液：分别吸取米酵菌酸和毒黄素标准储备溶液用甲醇稀释定容，依次配制成浓度为0.5μg/mL、1.0μg/mL、2.0μg/mL、5.0μg/mL、10.0μg/mL、25.0μg/mL的标准系列工作液，临

用时配制。

8测定步骤

8.1试样溶液的制备

称取粉碎混匀的试样2g（精确至0.01g）于50mL塑料离心管中，加入80%甲醇10mL，涡旋2min，超声10min，5000r/min离心5min，吸取上清液至预装dSPEEMR-Lipid吸附剂的离心管中，涡旋2min，5000r/min离心5min，取上清液于氮吹管中；重复上述步骤，合并上清液，氮吹至低于1mL，用甲醇定容至1mL，0.45μm滤膜过滤后进行分析。

8.2色谱条件

a)色谱柱：C18色谱柱，4.6mm×250mm，5μm或同等性能的色谱柱；

b)流速：1.0mL/min；

c)柱温：30℃;

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d)检测波长：258nm；

e)进样体积：10μL。

f)流动相：A：甲醇，B：水用甲酸调节pH至3.0。梯度洗脱见表1：

表1梯度洗脱表

时间（min）

流动相A（%）

流动相B（%）

0～5

20

80

5～6

20→90

80→10

6～14

90

10

14～15

90→20

10→80

15～20

20

80

8.3标准曲线的制作

将米酵菌酸和毒黄素标准系列工作液注入液相色谱仪中，测定相应的峰面积，以标准工作液的浓度

为横坐标，以峰面积为纵坐标，绘制标准曲线。米酵菌酸和毒黄素标准溶液的色谱图见图A.1。

8.4试样溶液的测定

将试样溶液注入液相色谱仪中，以保留时间定性，同时记录峰面积，根据标准曲线得到待测液中目

标物的含量。

9结果的计算

试样中被测物的含量按式（1）计算：

X=口00……….(1)

式中：

X——试样中被测物的含量，单位为毫克每千克（mg/k