有哪些信誉好的足球投注网站- 1、本文档共3页，可阅读全部内容。
- 2、有哪些信誉好的足球投注网站（book118）网站文档一经付费（服务费），不意味着购买了该文档的版权，仅供个人/单位学习、研究之用，不得用于商业用途，未经授权，严禁复制、发行、汇编、翻译或者网络传播等，侵权必究。
- 3、本站所有内容均由合作方或网友上传，本站不对文档的完整性、权威性及其观点立场正确性做任何保证或承诺！文档内容仅供研究参考，付费前请自行鉴别。如您付费，意味着您自己接受本站规则且自行承担风险，本站不退款、不进行额外附加服务；查看《如何避免下载的几个坑》。如果您已付费下载过本站文档，您可以点击 这里二次下载。
- 4、如文档侵犯商业秘密、侵犯著作权、侵犯人身权等，请点击“版权申诉”（推荐），也可以打举报电话：400-050-0827(电话支持时间：9:00-18:30)。
- 5、该文档为VIP文档，如果想要下载，成为VIP会员后，下载免费。
- 6、成为VIP后，下载本文档将扣除1次下载权益。下载后，不支持退款、换文档。如有疑问请联系我们。
- 7、成为VIP后，您将拥有八大权益，权益包括：VIP文档下载权益、阅读免打扰、文档格式转换、高级专利检索、专属身份标志、高级客服、多端互通、版权登记。
- 8、VIP文档为合作方或网友上传，每下载1次， 网站将根据用户上传文档的质量评分、类型等，对文档贡献者给予高额补贴、流量扶持。如果你也想贡献VIP文档。上传文档
QPCR题库.--第1页
QPCR题库.
1.简述QPCR的原理，并写出其数学公式（不用写推导过程）。
任一样本q目的基因x达到阈值时分子数
Xqx=X0×(1+EX)ctx
任一样本q目的内标基因r达到阈值时分子数
Xqr=R0×(1+ER)ctr
Xqx=Xqr
X0×(1+EX)ctx=R0×(1+ER)ctr
X0/R0=(1+ER)ctr/(1+EX)ctx
对于一个小于150bp的扩增片断而言，如果Mg2+浓度、引物都
进行了适当的优化，扩增效率接近于1。
2.QPCR染料法与探针法的异同？
探针类是利用与靶序列特异杂交的探针来指示扩增产物的增加，
特异性高
染料类则是利用荧光染料或者特殊设计的引物来指示扩增的增加，
简便易行。
SYBRGreenI是一种与双链DNA结合发光的荧光染料。所以可
以根据SYBRGreenI的荧光信号强度检测出PCR体系存在的双链
DNA数量SYBRGreenI的最大吸收波长约为497NM，发射波长最大
约为520NM
优点：通用性较好，价格相对低廉，国内外科研中使用比较普遍。
缺点：由于SYBRGreenI不能识别特异的双链，对PCR反应中
的非特异性扩增及引物二聚体也会产生荧光，本底较高，临床应用时
会有假阳性出现
TaqMan探针是一种寡核苷酸探针，它设计与目标序列上游引物
和下游引物之间的序列配对。
常用的荧光由FAM,TET,VIC,HET，荧光淬灭基团如TAMRA
荧光基团连接在探针的5’末端，而淬灭剂则在3’末端。当完整
的探针与目标序列配对时，荧光基团发射的荧光因与3’端的淬灭剂接
QPCR题库.--第1页
QPCR题库.--第2页
近而被淬灭。但在进行延伸反应时，聚合酶的5’外切酶活性将探针进
行酶切，使
得荧光基团与淬灭剂分离。随着扩增循环数的增加，释放出来的
荧光基团不断积累。因此荧光强度与扩增产物的数量呈正比关系。
Taqman探针检测的是积累荧光。当探针完整的时候，由于3?端
的荧光淬灭基团在吸收5?端报告基团所发射的荧光能量，本身会发射
波长不同的荧光而导致本底高，因此TaqMan探针近来又有新的发展
——TaqManMGB探针。
MGB探针的淬灭基团采用非荧光淬灭基团(Non-Fluorescent
Quencher)，本身不产生荧光，可以大大降低本底信号的强度。同时
探针上还连接有MGB(MinorGrooveBinder)修饰基团，可以将探针
的Tm值提高10°C左右。因此为了获得同样的Tm值，MGB探针可
以比普通TaqMan探针设计得更短，既降低了合成成本，也使得探针
设计的成功率大为提高——因为在模板的DNA碱基组成不理想的情况
下，短的探针比长的更容易设计。实验证明，TaqManMGB探针对于
富含A/T的模板可以区分得更为理想。
3.理论上来说，标准曲线的第一梯度和第二梯度的CT值，相差多
少？为什么。
文档评论（0）