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药品微生物限度检验误差分析

通过对造成检验误差原因的分析，消除或尽可能降低在实验过程中可

能发生的误差和错误结果，提高检验的准确性。

药品是特殊的商品，必须保证其质量，用药的安全与有效。应用微生

物学技术方法监控药品的有效性及安全性是药品微生物学检验质量

保证的基本任务。生物检验法是目前微生物检测的首选法，但此法操

作程序多，步骤繁杂，任何疏漏或非标准化的操作条件，均可导致测

定结果的误差。为了使检验结果反映药品的污染状况，在具体检验操

作中还需要有一系列的技术措施保证，以便客观地反映污染程度，提

高检验结果的准确性，消除或尽可能降低实验过程中可能发生的误差

和错误结果。下面就造成检验误差的原因及控制方法分述如下：

1.培养基的影响

培养基是培养检测细菌的营养制品，其质量的好坏、稳定与否，对检

验结果有极为重要的影响。多数厂家生产的干燥培养基一般质量较稳

定，须按使用说明条件配制和存放，在规定的效期内使用，对初购的

培养基应进行质量检查。对自配培养基应测定其有效性及灵敏度。在

更换配方成分时应进行质量检查。

1.1已知茵对照试验

各种专一和特殊用途的培养基，特别是生化鉴别试验培养基，在初次

使用前，均须用已知的菌株作对照，测定各种生化及其它反应的质量

效果，以保证培养基各种鉴别反应的灵敏度和准确性。

1.2酸碱度测定

各种细菌皆有其适宜生长繁殖的pH值范围，而且有些细菌要求较严，

因此培养基的pH极为重要。配制过程中测试pH时，必须以冷却后

的温度为准，否则颜色反应不准；各种培养基所要求的最终pH，是

制成品灭菌冷却后的实际pH。因冷热的温差较大，其pH各异。另

外，调节pH时应逐渐加碱，防止过量，否则如再加盐酸矫正，必将

会增加培养基内的含盐量，可降低培养基的使用效果，影响细菌生长。

用氢氧化钠调节的弱碱性培养基，高压灭菌前pH可比最终pH约高

0．2左右，灭菌后基本合适。如用碳酸氢钠调节pH的培养基，灭菌

前的酸碱度应稍低于最终要求的pH值，一般灭菌后稍增高或不变。

1.3培养基的制备

制备后的培养基应及时灭菌，不应放置，避免细菌繁殖。要取均匀的

供试液注皿，如取上清液或沉淀物对试验结果必然有影响。注皿时培

养基应在(45±1)℃，高于45℃时易造成细菌受损或致死，低于45℃时

易凝固，影响混匀，因此使用前可用水浴保温效果较好。从供试品稀

释、注平皿、倾注培养基，全部操作应在1h内完成，避免由于时间

过长，导致细菌细胞繁殖或死亡。培养基平皿要及时与皿内供试液振

摇均匀，防止细菌重叠生长或成片，影响计数。

2.设备的影响

对各种器械及设备均应有定期检定与维修记录，以保证其正常使用。

各种培养箱除定期计量认证外，于培养箱内置放最高、最低温度计，

每天观察温度波动范围。玻璃仪器、容量仪器须校验，玻璃器械均应

洗涤干净，不残留酸碱及抑菌物质。

3.计数误差

3.1

在进行菌落计数时，应仔细观察。菌落生长小而密集，最易发生计数

误差，要仔细判断。勿漏计细小的、琼脂内和平皿边缘生长的菌落，

同时应注意细菌菌落与供试品中颗粒、沉淀物、气泡等的鉴别。必要

时用放大镜或低倍显微镜直接观察或挑取可疑物涂片镜检。如仍难区

别，可延长培养时间5～7d，细菌菌落常会生长增大而容易鉴别。

3.2

供试品稀释液中常含有不溶性原料、辅料，培养基注皿后也可能产生

沉淀物，经过培养后有时形成数量很多且难与菌落相鉴别的有形物，

为了有利于菌落计数，可在操作时将适宜稀释级的稀释液多增加注皿

1～2个，注皿后不经培养而放置于冰箱(勿冻结)中，在计数菌落时作

为对照。或用0.001％TTC营养琼脂注皿，经培养后可将细菌菌落与

其他有形物区别开来。

（小编注：根据15版中国药典，营养琼脂已不使用；TTC已不使用）

3.3

供试品如为微生物制剂，应将有效微生物菌落排除，不可计在菌数内。

排除的方法需按该制剂微生物品种而定，并须观察菌落特征及染色形

态。例如，乳酸菌素制剂中含量测定与细菌总数测定分别采用不同方

法加以区别。

3.4

菌落生长呈蔓延趋势者，细菌点计需在24h，霉菌点计需在48h作初

步点计(点计霉菌菌落时，动作宜轻，勿反复翻转平板或造成震动，

使早期形成的孢子散落在平板的其它部位，又萌生新的霉菌菌落，导

致计数误差。

3.5

由于培养中一些菌落蔓延生长而影响另一些菌落生长，甚至掩盖了一

些菌落，干扰计数。防止菌落蔓延方法如下：

(1)加0.001％1Tc营养琼脂在倾注培养基前，在每1000ml营