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人的外周血淋巴细胞培养

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一、实验目的：

二、实验原理：

三、实验材料：

四、操作步骤：

五、结果分析：

六、参考文献：

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一、实验目的：

掌握人体微量血液体外培养、制备染色体标本的方法。

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二、实验原理：

外周血液中的小淋巴细胞，几乎都处在G1期(或Go期)，

一般情况下是不再分裂的，在培养液中参加植物凝血素

(PAH)时，这种小淋巴细胞受刺激转化成为淋巴母细胞，

随后进入有丝分裂。这样经过短期培养，秋水仙素的处

理，低渗和固定，就可获得大量的有丝分裂细胞。本方

法已为临床医学、病毒学，药理学、遗传毒理学等方面

广泛应用。

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三、实验材料：

人的外周血。

用具:

2毫升灭菌注射器，离心管，吸管，试管架，量筒，

培养瓶，试剂瓶，酒精灯，烧杯，载玻片，切片盒，

天平，离心机，恒温培养箱，显微镜。

器皿的清洗和消毒

玻璃器皿在使用前，均应用肥皂水洗刷，清水冲净，烘

干后浸泡在洗液中至少2h，再用流水冲洗，烘干待消毒。

将已洗净、烘干的玻璃器皿装入铝盒或用纸包装，放入

枯燥消毒箱内；150℃1h。

隔离衣、口罩。橡皮塞，注射用针筒等那么用高温高压

消毒(15磅15min)。

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三、实验材料：

药品

(1)RPMI“1640〞培养基：称取“1640〞粉末10.5

1000ml的双蒸水溶解，如溶液出现混浊或难以溶解时，可

用干冰或CO2气体处理，如pH值降至6.0时，那么可溶解

而透明。每1000ml溶液加NaHCO，1.0－1.2g，以干冰或

CO2气体校正pH至7.0－7.2。立即以5号或6号细菌漏斗过

滤灭菌，分装待用。

(2)肝素：作为抗凝剂使用。称取该粉末160mg(每

126U)，用40ml

500U。高压消毒磅15min。

(3)秋水仙素：作为有丝分裂的阻止剂，它能改变细胞质

的粘度；抑制细胞分裂时纺锤体形成，使细胞分裂停留在

中期。称取秋水仙素4mg，用100ml生理盐水溶解，用6号

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细菌漏斗过滤，然后放入冰箱4℃保存。使用时用1ml注射

三、实验材料：

(4)植物凝血素(PHA)

取PHA的方法有两种。一种比较简单，直接用四季豆的浸

出液；另一种较复杂，最后制品为粉末。如用之得当，二

种方法均可获得良好的效果。

盐水浸取法：最好用皮色四季豆，但其它颜色如红斑

色、黑色.黄色，白色的四季豆亦可。取豆子20g，用水洗

净可能粘附在种子外面的化学药物。先在水中浸过夜(4℃)，

次日倒去水分，将豆子放入组织搅碎器内，加30ml生理盐

水，开动搅碎器使之成为粘糊状，向搅碎器再加70ml生理

盐水，混合均匀。置冰箱24h。然后以3000转／min离心

15min，取上清液