细胞增殖与调控 (2).ppt

关于细胞增殖与调控(2)细胞无限制增长对个体来说意味着癌症;个体无限制繁殖对地球来说意味着灾难。第2页,共25页，星期六，2024年，5月第一节细胞周期与细胞分裂一、细胞周期概述：细胞周期指由细胞分裂结束到下一次细胞分裂结束所经历的过程（也称细胞生活周期，或细胞繁殖周期），可分为四个阶段：①G1期(gap1)，指从有丝分裂完成到DNA复制之前的间隙时间；②S期(synthesisphase)，指DNA复制的时期，只有在这一时期H3-TDR才能掺入新合成的DNA中；第3页,共25页，星期六，2024年，5月③G2期(gap2)，指DNA复制完成到有丝分裂开始之前的一段时间；④M期又称D期(mitosisordivision)，细胞分裂开始到结束。G0期：细胞暂时离开细胞周期，停止分裂，去执行一定的功能，称静止期细胞，G0期多发生在G1期。G0期一旦得到信号，会迅速返回细胞周期（如结缔组织中的成纤维细胞等）。第4页,共25页，星期六，2024年，5月细胞周期第5页,共25页，星期六，2024年，5月细胞周期分为4个阶段第6页,共25页，星期六，2024年，5月从增殖的角度来看，可将高等动物的细胞分为三类：①连续分裂细胞，连续进行细胞周期运转因而又称为周期细胞，如表皮生发层细胞、部分骨髓细胞。②休眠细胞，暂不分裂，但在适当的刺激下可重新进入细胞周期，称G0期细胞，如淋巴细胞、肝细胞等。③不分裂细胞，指不可逆地脱离细胞周期，不再分裂的细胞，又称终端细胞，如神经、肌肉、多形核细胞等等。第7页,共25页，星期六，2024年，5月周期中的主要事件G1期：合成蛋白、糖类、脂类等，但不合成DNA，是细胞的最初生长期。决定G1期向S期转换的特定时期称起始点（或限制点，或检验点），受内外多种因素的控制。S期：DNA和组蛋白合成，两者立即结合形成核小体。G2期：合成大量蛋白质，能否进入M期，受G2期检验点的控制。M期：细胞分裂第8页,共25页，星期六，2024年，5月ExperimentaldemonstrationofthecoordinatedSynthesisofDNAandhitones.第9页,共25页，星期六，2024年，5月细胞周期长短测定：细胞周期的时间长短与细胞类型有关，如：小鼠十二指肠上皮细胞的周期为10小时，人类胃上皮细胞24小时，骨髓细胞18小时，培养的人成纤维细胞18小时，CHO细胞14小时，HeLa细胞21小时。不同类型细胞的G1长短不同，是造成细胞周期差异的主要原因。第10页,共25页，星期六，2024年，5月细胞周期各阶段的时间(细胞周期测定)TG2－G2期时间，TS－S期时间，TC－细胞，TM－M期时间：（M/总）X周期时间，TG1＝TC－（TG2＋TM＋TS）脉冲标记DNA复制和细胞分裂指数观察测定法H3-TdR标记，洗涤，培养，定时取样，放射自显影分析BrdU标记，抗体染色观察第11页,共25页，星期六，2024年，5月流式细胞仪检测细胞周期流式细胞分选仪检测法根据DNA含量分类细胞，根据类群细胞的数量推断时间。第12页,共25页，星期六，2024年，5月细胞周期的时间第13页,共25页，星期六，2024年，5月细胞同步化：细胞同步化(synchronization)是指在自然过程中发生或经人为处理造成的细胞周期同步化，前者称自然同步化，后者称为人工同步化。第14页,共25页，星期六，2024年，5月1、自然同步化多核体：如粘菌只进行核分裂，而不发生胞质分裂，形成多核体。数量众多的核处于同一细胞质中，进行同步化分裂，使细胞核达108，体积达6~9cm。某些水生动物的受精卵：如海胆卵可以同时授精，最初的3次细胞分裂是同步的，再如大量海参卵受精后，前9次细胞分裂都是同步化进行的。增殖抑制解除后的同步分裂：如真菌的休眠孢子移入适宜环境后，它们一起发芽，同步分裂。第15页,共25页，星期六，2024年，5月2、人工同步化选择同步化：有丝分裂选择法：使单层培养的细胞处于对数增殖期，此时分裂活跃。有丝分裂细胞变圆隆起，与培养皿的附着性低，此时轻轻振荡，M期细胞脱离器壁，悬浮于培养液中，收集培养液，再加入新鲜培养液，依法继续收集，则可获得一定数量的中期细胞。其优点是操作简单，同步化程度高，细胞不受药物伤害，缺点是获得的细胞数量较少。（分裂细胞约占1%～2%）