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pET表达系统的原理

pET表达系统的原理强大、灵活的pET表达系统使用乳糖或乳糖类似物进行诱导表达，表达的时机完全由人为决定，可控性强。非诱导培养条件下，采用一定的措施可以使目的基因完全处于沉默状态而不转录。充分诱导时，几乎所有的细胞资源都用于表达目的蛋白；诱导表达后仅几个小时，目的蛋白通常可以占到细胞总蛋白的50%以上。可控制的表达低本底的表达高效率的表达

内容介绍乳糖操纵子的正负调控T7RNA聚合酶pET表达系统123

乳糖操纵子的负调控IPOZYAImRNAImRNA翻译出的阻遏蛋白结合到启动子部位，阻止lac操纵子基因的转录IPOZYAImRNAlacmRNA诱导物与阻遏蛋白结合使阻遏蛋白无法与启动子结合，转录顺利进行，表达相应的酶诱导物存在时诱导物不存在时诱导物诱导物

乳糖操纵子的正调控IPOZYAlacmRNA在细菌饥饿时，胞内的cAMP浓度会上升，与CAP结合促使后者活化。蛋白复合体可以结合到lac启动子区域，提高启动子的转录效率。诱导物诱导物cAMPCAP

lacUV5与cAMP-CAP复合体的亲和能力大大降低在没有cAMP-CAP复合体的情况下能更好的转录laclacUV5只受lacI阻遏蛋白调控

T7RNA聚合酶λ(DE3)噬菌体，单链蛋白。只识别λ噬菌体启动子，不识别大肠杆菌启动子。噬菌体启动子不能被大肠杆菌RNA聚合酶识别。RNA的合成速度是大肠杆菌RNA聚合酶的5倍来源专一性转录效率

pET系统表达原理lacUV5T7RNAPolymerasegeneE.Coli基因组lacI阻遏蛋白诱导的情况下pET目标基因T7启动子乳糖或IPTG

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