表达新型肿瘤抑制基因p53的重组腺病毒.pdfVIP

(19)中华人民共和国国家知识产权局

(12)发明专利说明书

(10)申请公布号CN1966683A

(43)申请公布日2007.05.23

(21)申请号CN200510101271.7

(22)申请日2005.11.17

(71)申请人王尚武;朱雅南

地址510635广东省广州市国际企业孵化器A区610房

(72)发明人王尚武朱雅南

(74)专利代理机构

代理人

(51)Int.CI

C12N15/12

C12N15/861

C07K14/435

A61K48/00

A61K38/17

A61P35/00

权利要求说明书说明书幅图

(54)发明名称

表达新型肿瘤抑制基因p53的重组

腺病毒

(57)摘要

本发明为一种表达新型肿瘤抑制基

因p53的重组腺病毒的表达结构，其主要

特征为1)野生型P53抑癌基因的第72位氨

基酸由脯氨酸突变成为精氨酸，其他氨基

酸组成及其排列顺序不变；2)该P53抑癌

基因在其N－末端以内切酶Nhe1和C－末

端以内切酶BamH1片段拼接于穿梭质粒

pDC315超强启动子mMCV的下游；和3)

重组的腺病毒载体为以Ad35纤突结取代

Ad5型腺病毒的纤突结的复制缺陷型腺病

毒载体。该新型p53抑癌基因腺病毒具有

感染力更强、感染组织/细胞谱更广、表达

新型p53抑癌基因更强、其产物具有更强

细胞凋亡生物功能。

法律状态

法律状态公告日法律状态信息法律状态

权利要求说明书

1.一种表达新型肿瘤抑制基因p53的重组腺病毒的表达结构。其主要特征为：

a).人野生型P53抑癌基因的第72位氨基酸由脯氨酸突变成为精氨酸，其他氨基酸

组成及其排列顺序不变；

b).该P53抑癌基因在其N-末端以内切酶Nhe1和C-末端以内切酶BamH1片段拼接

于穿梭质粒pDC315超强启动子mMCV的下游；

c).重组的腺病毒载体为以Ad35纤突结取代Ad5型腺病毒的纤突结的复制缺陷型腺

病毒载体；

d).该新型p53抑癌基因腺病毒表达系统具有感染力更强、感染组织/细胞谱更广、

新型p53抑癌基因表达更强、具有更强细胞凋亡生物功能。

2.根椐权利要求1的一种多肽，其含有下列氨基酸序列

a).与人肿瘤抑制基因P53的亲本多肽的氨基酸序列基本一致，仅有一个氨基酸的

取代，即此肿瘤抑制基因P53的第72位氨基酸由精氨酸(R72)代替野生型P53同一

位置的脯氨酸(P72)；

b).根椐权利1要求，所述肿瘤抑制基因P53亲本来源于人；

3.根椐权利要求1所述重组腺病毒，其特征在于，新型人肿瘤抑制基因p53表达盒

中所含的启动子序列选自：巨细胞病毒启动子，包括其增强突变型；牛乳头瘤病毒

启动子；肝胎儿甲型球蛋白启动子(AFP，胎甲球蛋白启动子)；人前列腺癌特异因

子启动子和肿瘤特异性PEG-3基因启动子。

4.根椐权利要求1所述重组腺病毒，其特征在于，该复制缺陷型腺病毒为Ad5、

Ad2和/或突变型Ad5型腺病毒载体，后者即为Ad5型腺病毒的纤突结突变的复制

缺陷型腺病毒载体-Ad35；以及R72型p53在腺相关病毒(AAVs)或其它病毒载体的

表达。

5.人肿瘤抑制基因P53基因第72位氨基酸密码子核苷酸突变方法、设计引物、真

核细胞表达载体及其腺病毒穿梭质粒，其特征在于，该方法包括：采用基因突变技

术，使野生型第72位脯氨酸的密码子(P72)突变成精氨酸的密码子(R72)。

a).以人肿瘤抑制基因P53基因cDNA为模板，用人工合成的，人肿瘤抑制基因P53

基因N-末端序列核苷酸的正向引物和