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(19)中华人民共和国国家知识产权局
(12)发明专利说明书
(10)申请公布号CN1966683A
(43)申请公布日2007.05.23
(21)申请号CN200510101271.7
(22)申请日2005.11.17
(71)申请人王尚武;朱雅南
地址510635广东省广州市国际企业孵化器A区610房
(72)发明人王尚武朱雅南
(74)专利代理机构
代理人
(51)Int.CI
C12N15/12
C12N15/861
C07K14/435
A61K48/00
A61K38/17
A61P35/00
权利要求说明书说明书幅图
(54)发明名称
表达新型肿瘤抑制基因p53的重组
腺病毒
(57)摘要
本发明为一种表达新型肿瘤抑制基
因p53的重组腺病毒的表达结构,其主要
特征为1)野生型P53抑癌基因的第72位氨
基酸由脯氨酸突变成为精氨酸,其他氨基
酸组成及其排列顺序不变;2)该P53抑癌
基因在其N-末端以内切酶Nhe1和C-末
端以内切酶BamH1片段拼接于穿梭质粒
pDC315超强启动子mMCV的下游;和3)
重组的腺病毒载体为以Ad35纤突结取代
Ad5型腺病毒的纤突结的复制缺陷型腺病
毒载体。该新型p53抑癌基因腺病毒具有
感染力更强、感染组织/细胞谱更广、表达
新型p53抑癌基因更强、其产物具有更强
细胞凋亡生物功能。
法律状态
法律状态公告日法律状态信息法律状态
权利要求说明书
1.一种表达新型肿瘤抑制基因p53的重组腺病毒的表达结构。其主要特征为:
a).人野生型P53抑癌基因的第72位氨基酸由脯氨酸突变成为精氨酸,其他氨基酸
组成及其排列顺序不变;
b).该P53抑癌基因在其N-末端以内切酶Nhe1和C-末端以内切酶BamH1片段拼接
于穿梭质粒pDC315超强启动子mMCV的下游;
c).重组的腺病毒载体为以Ad35纤突结取代Ad5型腺病毒的纤突结的复制缺陷型腺
病毒载体;
d).该新型p53抑癌基因腺病毒表达系统具有感染力更强、感染组织/细胞谱更广、
新型p53抑癌基因表达更强、具有更强细胞凋亡生物功能。
2.根椐权利要求1的一种多肽,其含有下列氨基酸序列
a).与人肿瘤抑制基因P53的亲本多肽的氨基酸序列基本一致,仅有一个氨基酸的
取代,即此肿瘤抑制基因P53的第72位氨基酸由精氨酸(R72)代替野生型P53同一
位置的脯氨酸(P72);
b).根椐权利1要求,所述肿瘤抑制基因P53亲本来源于人;
3.根椐权利要求1所述重组腺病毒,其特征在于,新型人肿瘤抑制基因p53表达盒
中所含的启动子序列选自:巨细胞病毒启动子,包括其增强突变型;牛乳头瘤病毒
启动子;肝胎儿甲型球蛋白启动子(AFP,胎甲球蛋白启动子);人前列腺癌特异因
子启动子和肿瘤特异性PEG-3基因启动子。
4.根椐权利要求1所述重组腺病毒,其特征在于,该复制缺陷型腺病毒为Ad5、
Ad2和/或突变型Ad5型腺病毒载体,后者即为Ad5型腺病毒的纤突结突变的复制
缺陷型腺病毒载体-Ad35;以及R72型p53在腺相关病毒(AAVs)或其它病毒载体的
表达。
5.人肿瘤抑制基因P53基因第72位氨基酸密码子核苷酸突变方法、设计引物、真
核细胞表达载体及其腺病毒穿梭质粒,其特征在于,该方法包括:采用基因突变技
术,使野生型第72位脯氨酸的密码子(P72)突变成精氨酸的密码子(R72)。
a).以人肿瘤抑制基因P53基因cDNA为模板,用人工合成的,人肿瘤抑制基因P53
基因N-末端序列核苷酸的正向引物和
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