DB34T 2071-2014 杂交玉米及亲本真实性鉴定DNA分析方法.pdfVIP

ICS67.060

B22

DB34

安徽省地方标准

DB34/T2071—2014

杂交玉米及亲本真实性鉴定DNA分析方法

IdentificationofgenuinenessofhybridcornanditsparentsusingDNAanalysis

method

2014-02-17发布2014-03-17实施

安徽省质量技术监督局发布

DB34/T2071—2014

前言

本标准按照GB/T1.1-2009给出的规则起草。

本标准由安徽省质量技术监督局提出，安徽省农业标准化技术委员会归口。

本标准起草单位：安徽省农业科学院水稻研究所。

本标准主要起草人：陆徐忠、杨剑波、倪金龙、刘勋辉、李莉、汪秀峰、马卉、张小娟。

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DB34/T2071—2014

杂交玉米及亲本真实性鉴定DNA分析方法

1范围

本标准规定了杂交玉米及亲本品种真实性鉴定SSR分子标记法的术语和定义、原理、试剂与溶液、

主要仪器、操作步骤和结果判定。

本标准适用于玉米单交种和自交系的品种真实性鉴定。

2规范性引用文件

下列文件对于本文件的应用是必不可少的。凡是注日期的引用文件，仅所注日期的版本适用于本文

件。凡是不注日期的引用文件，其必威体育精装版版本（包括所有的修改单）适用于本文件。

GB/T3543.2农作物种子检验规程扦样

GB/T3543.4农作物种子检验规程发芽试验

GB4404.1粮食作物种子第1部分:禾谷类

GB/T6682分析实验室用水规格和试验方法

3术语和定义

下列术语和定义适用于本文件。

3.1

品种真实性varietalgenuineness

供检品种与文件记录(如标签等)是否相符。本标准中指品种间在DNA分子标记带型上的一致性。

3.2

标准样品standardsample

经权威机构认定认证的代表已知品种特征特性的样品，对有性繁殖作物而言，一般为种子。

4原理

根据SSR序列两端保守的单拷贝序列设计特异引物，利用PCR技术扩增每个位点的重复次数，通

过电泳分析其长度多态性，进行杂交玉米及亲本的真实性鉴定。

5试剂与溶液

5.1仅使用分析纯试剂和符合GB/T6682规定的一级水。

5.2β-巯基乙醇

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DB34/T2071—2014

5.3异丙醇

5.4剥离硅烷

5.5四甲基乙二胺（TEMED）

5.6TaqDNA聚合酶

5.7PCR反应缓冲液（10×Buffer）

5.825mmol/L氯化镁溶液（MgCl2）

5.9DNA分析仪专用丙烯酰胺胶液

5.10DNA分析仪专用分子量内标

5.11DNA分析仪专用电泳缓冲液

5.121mol/L三羟甲基氨基甲烷-盐酸溶液（Tris-Hcl）：称取121.1g三羟甲基氨基甲烷（Tris）

溶解于800mL水中，用盐酸（HCl）调pH至8.0，加水定容至1000mL。在103.4kPa（121℃)条

件下灭菌20min，4℃储存。

5.1310mol/L氢氧化钠溶液（Na