苯甲酸、山梨酸、脱氢乙酸的测定 高效液相色谱-串联质谱法.docx

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葡萄酒中苯甲酸、山梨酸和脱氢乙酸的测定高效液相色谱-串联质谱法

1范围

本文件规定了葡萄酒中苯甲酸、山梨酸、脱氢乙酸的高效液相色谱-串联质谱检测方法。本文件适用葡萄酒中苯甲酸、山梨酸和脱氢乙酸的测定和确证。

2规范性引用文件

下列文件对于本文件的应用是必不可少的。凡是注日期的引用文件，仅注日期的版本适用于本文件。凡是不注日期的引用文件，其必威体育精装版版本（包括所有的修改单）适用于本文件。

GB/T6682分析实验室用水规格和实验方法

GB5009.28-2016《食品中苯甲酸、山梨酸和糖精钠的测定》GB5009.121-2016《食品中脱氢乙酸的测定》

T/EJSPSH002-2023《食品中苯甲酸、山梨酸、糖精钠和脱氢乙酸的测定高效液相色谱法》SN/T4675.15-2016《出口葡萄酒中水杨酸、脱氢乙酸和对氯苯甲酸的测定液相色谱法》

SN/T2012-2019《出口食醋中苯甲酸、山梨酸的检测方法液相色谱及液相色谱-质谱/质谱法》

3术语和定义

本文件没有需要界定的术语和定义。

4原理

试样经20%的甲醇水溶液超声提取，QuEChERS法净化后，经反相色谱柱分离，以保留时间定性，供高效液相色谱-串联质谱仪测定和确证，外标法定量。

5试剂和材料

本方法所用的试剂，除另有规定外，均为分析纯，水为GB/T6682规定的一级水。

5.1试剂

5.1.1甲醇：色谱纯。

5.1.2乙酸铵：色谱纯。

5.1.3十八烷基（C18）粉末。

5.1.4N-丙基乙二胺（PSA）粉末。

5.1.55mmol/L乙酸铵水溶液：称取0.385g乙酸铵，加水定容至1L，振摇溶解。5.1.620%的甲醇水溶液：取20mL甲醇和80mL水混合均匀。

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5.2标准品

5.2.1标准品：苯甲酸（纯度：99.0%，CAS：65-85-0）、山梨酸（纯度：98.8%，CAS：22500-92-1）、脱氢乙酸（纯度：99.3%，CAS：520-45-6）。

5.2.2单标准储备液（1.0mg/mL）：分别准确称取苯甲酸、山梨酸和脱氢乙酸适量，用水溶解并定容至10.0mL容量瓶中，配制成1.0mg/mL的单标准储备溶液，冷藏贮存，保存期限为6个月。

5.2.3混合标准储备溶液的配制：分别移取苯甲酸、山梨酸和脱氢乙酸单标准储备溶液适量，混合后用水逐级稀释得到10.0μg/mL的混合标准储备溶液，冷藏，保存期限为1个月。

5.2.4标准工作溶液：分别准确吸取不同体积混合标准储备液，用空白葡萄酒基质定容至1.0mL，配制成苯甲酸、山梨酸和脱氢乙酸的浓度分别为0.05、0.01、0.2、0.5、1.0、2.0μg/mL，临用现配。

6仪器和设备

6.1液相色谱-串联质谱仪：配备电喷雾离子源。6.2天平：感量0.1mg和0.01g。

6.3涡旋混合器。

6.4高速冷冻离心机：最大转速10000r/min。6.5超声波发生器。

6.6色谱柱：C18，2.1mm×100mm，粒径1.7μm或性能相当。

7分析步骤

7.1试液的提取

准确称取5.0g（精确至0.01mg）均匀制备的样品于50.0mL具塞离心管中，加入20%甲醇水溶液20mL，涡旋混合1min，超声10min，8000r/min离心5min，加入20%甲醇水溶液定容至50.0mL。移取10mL上清液，加入至盛有50mgPSA＋100mgC18粉末的净化管中，涡旋离心，经0.22μm水相滤膜过滤后，上机测定。

7.2仪器参考条件

7.2.1液相色谱参考条件

7.2.1.1柱温：30℃。

7.2.1.2流动相：A：5mmol/L乙酸铵水溶液，B：甲醇；梯度洗脱见表1。

7.2.1.3流速：0.3mL/min。

7.2.1.4进样量：5μL。

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表1流动相及梯度洗脱条件

时间/min

流速/（mL/min）

流动相A/%

流动相B/%

0.00

0.3

90

10

2.00

0.3

90

10

3.00

0.3

20

80

5.00

0.3

20

80

5.01

0.3

90

10

8.00

0.3

90

10

7.2.2质谱参考条件

7.2.2.1离子源：电喷雾离子源（ESI）。

7.2.2.2扫描方式：负离子扫描。

7.2.2.3检测方式：多反应监测（MRM）。

7.2.2.4鞘气温度：350℃。

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