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紫檀芪对C6胶质瘤细胞凋亡及Caspase—3活性的影响

目的：研究紫檀芪（pterostilbene，PTE）体外抑制C6胶质瘤细胞增殖并

诱导其凋亡的作用，探讨其可能的作用机制。方法：运用MTT法测定细胞存活

率，吖啶橙/溴化乙锭（AO/EB）双荧光染色观察C6细胞凋亡形态学变化，酶联

免疫吸附法（ELISA）测定Caspase-3活性变化，并用Westernblot法检测Fas、

FasL蛋白的表达水平。结果：由MTT结果知紫檀芪可以显著抑制C6细胞的增

殖（P＜0.01），呈现药物浓度与时间依赖性；AO/EB荧光染色（24h）可见典型

的凋亡形态学特征；酶联免疫吸附（ELISA）检测表现为随PTE浓度升高，

Caspase-3活性逐步升高（P＜0.01）；Westernblot检测显示PTE可以使Fas、FasL

蛋白表达显著增加（P＜0.01）。结论：PTE可诱导胶质瘤细胞系C6细胞凋亡，

其作用机制可能与激活Fas/FasL通路、上调Caspase-3活性有关。

脑胶质瘤作为中枢神经系统最常见的恶性肿瘤，发病率及死亡率居颅内肿瘤

之首，具有无控增殖、侵润生长、易复发等特点[1-2]。目前脑胶质瘤的治疗方案

主要是以手术切除为主，化疗及放疗为辅，尽管综合以上各种治疗手段，但胶质

瘤患者的中位生存期并无明显改善，患者大多于明确诊断后1年内死亡[3]。近

年来，一些天然物质（青蒿琥酯、白藜芦醇、雷公藤内酯醇等）被逐渐应用于

肿瘤的防治，其优异的效果使人们越来越重视天然药物在抗肿瘤方面的研究与应

用[4-7]。目前关于白藜芦醇抗肿瘤的研究很多，其可抑制多种恶性肿瘤细胞的生

长[8-9]。紫檀芪（pterostilbene，PTE）作为白藜芦醇的甲基化衍生物，与白藜芦

醇相比，具有更高的的生物活性[10]，更好的安全性[11]。关于PTE治疗脑胶质

瘤的研究国内外目前尚无报道，本研究将以体外培养的脑胶质瘤C6细胞系作为

研究对象，观察PTE对其增殖及凋亡的影响，从而为临床药物治疗脑胶质瘤提

供新的思路与方法。现报道如下。

1材料与方法

1.1主要试剂与仪器大鼠脑胶质瘤C6细胞株（上海拜力生物科技有限公）；

PTE（南京世洲生物科技有限公司，纯度99%），用DMSO溶解。DMEM培养

基，0.25%胰酶和胎牛血清（Hyclone公司）；四甲基偶氮唑蓝（methylthiazolyl

tetrazolium，MTT）（上海碧云天生物技术有限公司）；Fas、FasL抗体（北京中

杉公司）；β-actin抗体（北京中杉公司）；大鼠Caspase-3Elisa试剂盒（上海恒

远生物科技有限公司）。Allegra64R超低溫高速离心机（Beckman公司）；Synergy

HT全自动酶标仪（Bio-Tek公司）；Tanon5200图像分析管理系统（上海天能科

技有限公司）；激光共聚焦显微镜（OLYMPUS）。1.2方法

1.2.1细胞培养将C6细胞用完全培养基（DMEM培养基、10%胎牛血清及

1%双抗）置于37℃、5%CO2、饱和湿度的培养箱中培养至对数期备用。

1.2.2MTT法检测PTE对C6细胞增殖的抑制作用调整细胞浓度为5×107/L，

96孔培养板中每孔加入100μ，L待其贴壁后，再加入PTE溶液100μ，使LPTE

终浓度为10、20、40μmol/L，对照组加入同体积含0.01%DMSO的完全培养基，

分别培养24、48、72h，加20μL的MTT，4h后弃上清，每孔加入DMSO150

μL，在37℃恒温摇床上震荡10min，酶标仪570/630nm处测定各组OD值。

1.2.3AO/EB荧光染色法检测细胞凋亡C6细胞以3×107/L的浓度铺100μL

于激光共聚焦培养皿，4h后弃掉旧培养液，加入不含胎牛血清的DMEM培养

基，继续培养4h后，加入PTE（分组同1.2.2）继续培养24h。吸弃原培养液，