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紫檀芪对C6胶质瘤细胞凋亡及Caspase—3活性的影响
目的:研究紫檀芪(pterostilbene,PTE)体外抑制C6胶质瘤细胞增殖并
诱导其凋亡的作用,探讨其可能的作用机制。方法:运用MTT法测定细胞存活
率,吖啶橙/溴化乙锭(AO/EB)双荧光染色观察C6细胞凋亡形态学变化,酶联
免疫吸附法(ELISA)测定Caspase-3活性变化,并用Westernblot法检测Fas、
FasL蛋白的表达水平。结果:由MTT结果知紫檀芪可以显著抑制C6细胞的增
殖(P<0.01),呈现药物浓度与时间依赖性;AO/EB荧光染色(24h)可见典型
的凋亡形态学特征;酶联免疫吸附(ELISA)检测表现为随PTE浓度升高,
Caspase-3活性逐步升高(P<0.01);Westernblot检测显示PTE可以使Fas、FasL
蛋白表达显著增加(P<0.01)。结论:PTE可诱导胶质瘤细胞系C6细胞凋亡,
其作用机制可能与激活Fas/FasL通路、上调Caspase-3活性有关。
脑胶质瘤作为中枢神经系统最常见的恶性肿瘤,发病率及死亡率居颅内肿瘤
之首,具有无控增殖、侵润生长、易复发等特点[1-2]。目前脑胶质瘤的治疗方案
主要是以手术切除为主,化疗及放疗为辅,尽管综合以上各种治疗手段,但胶质
瘤患者的中位生存期并无明显改善,患者大多于明确诊断后1年内死亡[3]。近
年来,一些天然物质(青蒿琥酯、白藜芦醇、雷公藤内酯醇等)被逐渐应用于
肿瘤的防治,其优异的效果使人们越来越重视天然药物在抗肿瘤方面的研究与应
用[4-7]。目前关于白藜芦醇抗肿瘤的研究很多,其可抑制多种恶性肿瘤细胞的生
长[8-9]。紫檀芪(pterostilbene,PTE)作为白藜芦醇的甲基化衍生物,与白藜芦
醇相比,具有更高的的生物活性[10],更好的安全性[11]。关于PTE治疗脑胶质
瘤的研究国内外目前尚无报道,本研究将以体外培养的脑胶质瘤C6细胞系作为
研究对象,观察PTE对其增殖及凋亡的影响,从而为临床药物治疗脑胶质瘤提
供新的思路与方法。现报道如下。
1材料与方法
1.1主要试剂与仪器大鼠脑胶质瘤C6细胞株(上海拜力生物科技有限公);
PTE(南京世洲生物科技有限公司,纯度99%),用DMSO溶解。DMEM培养
基,0.25%胰酶和胎牛血清(Hyclone公司);四甲基偶氮唑蓝(methylthiazolyl
tetrazolium,MTT)(上海碧云天生物技术有限公司);Fas、FasL抗体(北京中
杉公司);β-actin抗体(北京中杉公司);大鼠Caspase-3Elisa试剂盒(上海恒
远生物科技有限公司)。Allegra64R超低溫高速离心机(Beckman公司);Synergy
HT全自动酶标仪(Bio-Tek公司);Tanon5200图像分析管理系统(上海天能科
技有限公司);激光共聚焦显微镜(OLYMPUS)。1.2方法
1.2.1细胞培养将C6细胞用完全培养基(DMEM培养基、10%胎牛血清及
1%双抗)置于37℃、5%CO2、饱和湿度的培养箱中培养至对数期备用。
1.2.2MTT法检测PTE对C6细胞增殖的抑制作用调整细胞浓度为5×107/L,
96孔培养板中每孔加入100μ,L待其贴壁后,再加入PTE溶液100μ,使LPTE
终浓度为10、20、40μmol/L,对照组加入同体积含0.01%DMSO的完全培养基,
分别培养24、48、72h,加20μL的MTT,4h后弃上清,每孔加入DMSO150
μL,在37℃恒温摇床上震荡10min,酶标仪570/630nm处测定各组OD值。
1.2.3AO/EB荧光染色法检测细胞凋亡C6细胞以3×107/L的浓度铺100μL
于激光共聚焦培养皿,4h后弃掉旧培养液,加入不含胎牛血清的DMEM培养
基,继续培养4h后,加入PTE(分组同1.2.2)继续培养24h。吸弃原培养液,
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