广东省高三生物复习 第14章 第39讲 生物技术在其他方面的应用课件.pptVIP

生物技术实践;一、植物组织培养

1.原理：植物细胞的全能性

2.基本过程：;(1)脱分化和再分化的比较;3.影响因素

(1)外植体的选择：材料本身的种类、年龄、保存时间长短等。;(3)植物激素

①常用激素：生长素和细胞分裂素。

②使用激素顺序不同对试验结果的影响：;③生长素用量比细胞分裂素用量，其比值不同，对细胞发育的方向影响不同：

比值高时：有利于根的分化，抑制芽的形成

比值低时：有利于芽的分化，抑制根的形成

比值适中：促进愈伤组织的形成

(4)温度：一般将温度控制在18~22℃

(5)pH：一般将pH控制在5.8左右

(6)光照：每日用日光灯照射12h;4.实验操作步骤

(1)制备MS固体培养基：配制各种母液→配制培养基→灭菌

(2)外植体消毒：酒精溶液消毒→无菌水清洗→次氯酸钠(或氯化汞)溶液→无菌水清洗

(3)接种

(4)培养

(5)移栽

(6)栽培;5.月季的花药培养

(1)被子植物的花粉发育

小孢子母细胞→4个小孢子→1个小孢子(单核居中期)→1个小孢子(单核靠边期)→花粉粒(含一个花粉管细胞核和一个生殖细胞核);(3)影响花药培养的因素

①不同植物的诱导成功率很不相同；

②同种植物的生理状况；

③花粉发育时期；

④亲本植株的生长条件、材料和低温预处理以及接种密度等。;6.花粉植株的产生和植物茎的组织培养的比较;二、蛋白质的提取和分离

1.蛋白质的理化性质

(1)具有两性

(2)可以发生水解反应

(3)可溶性、具有胶体的性质

(4)盐析

(5)蛋白质的变性

(6)颜色反应;2.操作步骤

蛋白质的提取和分离一般为四步：

①样品处理→②粗分离→③纯化→④纯度鉴定

(1)样品处理;(1)红细胞的洗涤

①采集血样→②低速短时间离心→③吸取血浆→④盐水洗涤→⑤低速离心→⑥重复④⑤步骤三次

(2)血红蛋白的释放

将洗涤好的红细胞倒入烧杯中，加蒸馏水到原血液的体积，再加40%体积的甲苯，置于磁力搅拌器上充分搅拌10min。;(3)分离血红蛋白溶液

将搅拌好的混合液转移到离心管中，以2000r/min的速度离心10min后，试管中的溶液分为4层：

第1层(最上层)：甲苯层(无色透明)

第2层(中上层)：脂溶性物质沉淀层(白色薄层固体)

第3层(中下层)：血红蛋白的水溶液层(红色透明液体)

第4层(最???层)：杂质沉淀层(暗红色);(4)透析

取1mL的血红蛋白溶液装入透析袋中，将透析袋放入盛有300mL的物质的量浓度为20mmol/L的磷酸缓冲液中，透析12h，目的是除去样品中相对分子质量较小的杂质。

(2)凝胶色谱分离

①制作凝胶色谱柱

②装填凝胶色谱柱

③样品加入和洗脱;(3)结果分析与评价

①对于血液样品的处理，需要经过洗涤、释放、分离、透析几个步骤。由于血红蛋白与氧气结合变成鲜红色，与二氧化碳结合变成暗红色，所以刚分离后的血红蛋白溶液呈红色。

②红色区带的移动是实验成功与否的标志。红色区带在洗脱过程中均匀一致移动，说明实验分离成功。;三、PCR技术的基本操作和应用

1.细胞内DNA复制条件分析：;2.DNA分子复

制的人工控制

解开螺旋：在80~100℃时，DNA双螺旋打开，形成两条DNA单链，称为变性。

恢复螺旋：在50℃左右时，两条DNA单链重新形成双螺旋结构，称为复性。;3.PCR的反应过程

变性：在95℃时DNA解旋

复性：在50℃时引物与DNA单链结合

延伸：在72℃时合成DNA子链(两个引物间的序列);4.实验操作

(1)PCR反映体系：缓冲液、DNA模板、四种脱氧核苷酸原料、热稳定DNA聚合酶、两种RNA引物、水

(2)实验操作步骤：

①按照PCR反应体系配方配制反应液

②将PCR反应体系50μL用微量移液器转移到微量离心管中

③将微量离心管放到PCR仪

④设置PCR仪的工作参数

⑤DNA在PCR仪器中大量扩增;⑥水浴法：将微型离心管依次在95℃、55℃、72℃的恒温水浴锅中循环处理相应时间

5.实验注意事项：

(1)避免外源DNA污染：所用仪器、缓冲液、蒸馏水等必须进行高压灭菌

(2)缓冲液和酶分装成小份，-20℃保存

(3)每添加一种反应成分，更换一个移液器的枪头

(4)混匀后离心处理，使反应液集中在离心管底部;1.植物细胞表现出全能性的条件和步骤

植物细胞要表现出全能性，需要经过以下几个步骤：

成熟细胞→分生细胞→胚状体→完整植株

成熟细胞→愈伤组织→生根出芽→完整植株

诱导细胞的脱分化，需要的条件：①离体；②给予适宜营养和外界条件(包括光照、植物激素等);2.植物组织培养培养基、无土栽培培养液、微生物培养基的比较

无土栽培：液体培养液；不含有有机物及植物激素；培养过程中不需要更换培养液；不需要灭菌；

植物组织培养基：固体培养基；含有矿质元素、蔗糖、维生素、植物激素、有机添加