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工具酶;内容提要;第一节限制性核酸内切酶;一、概念;3.功能;图细菌的限制系统;图甲基化位点：DNA上的A/C;二、限制性内切酶的命名;限制酶的命名;图几种重要的限制酶;图几种限制酶的识别位点;三、限制性内切酶的分类;1.I型限制性内切酶;（2）切割位点;2.III型限制性内切酶;3.II型限制性内切酶;图Ⅱ类酶识别序列特点：回文序列;(3)平齐末端bluntend;(4)粘性末端stickyend;G?AATTC;CTGCA?G;③粘性末端的意义;图粘性末端连接;;四、同裂酶Isoschizomers;;五、同尾酶Isocaudamers;5’-G?GATCC-3’

3’-CCTAG?G-5’;5’-G

3’-CCTAG;六、限制酶的活性;星号活性:

改变反应条件，导致限制酶的专一性和切割效率的改变。

如EcoRI和BamHI等都有*活性。

使用时要防止星号活性。

;在低盐、高pH（8）时可识别和切割;七、三类限制酶的特性比较;八、影响限制性酶活性的因素;2.DNA的甲基化程度;3.温度Tm;4.缓冲液Buffer;九、限制性内切酶酶切图谱;图完全酶切;图部分酶切;2.限制性内切酶图谱;（2）酶切图谱的建立;3.限制酶酶切图谱的分析;4.酶切产物的检测;琼脂糖凝胶电泳图谱;第二节DNA连接酶ligase;一、DNA连接酶的种类;二、连接反应的条件;三、连接反应的机理;;图3’-OH对磷原子作亲核攻击;质粒DNA的去磷酸化;四、连接反应的温度;五、影响连接反应的因素;第三节DNA聚合酶;一、常用的DNA聚合酶;二、DNA聚合酶的特点;DNA聚合酶;三、各种DNA聚合酶的用途;（2）用DNA聚合酶I制备探针;标记;;切口转移法;1.纯化的DNA片段;2.Klenowfragment;（2）主要用途;;;mRNA;3.T4DNA聚合酶;;T4DNA聚合酶;（2）T4DNA聚合酶的用途;酶切中间产生两个末端标记;a.放射性标记;b.非放射性标记;纯化的DNA片段;光促生物素标记;ii）地高辛标记;图试剂盒(kit);iii）偶联酶及其底物;图化学发光底物;图HRPO和AP的显色反应底物;HRPO和AP的显色反应底物;发光反应机理;iv）用非放射性标记探针检测原理;图非放射性标记探针检测原理;核酸探针杂交筛选法的缺点;4.T7DNA聚合酶;（3）T7DNA聚合酶的特点;（3）T7DNA聚合酶的用途;5.修饰后的T7DNA聚合酶;6.反转录酶：AMV;;RNaseH;（3）逆转录酶的用途;图cDNA合成;②合成DNA探针;