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目录
前H
实验室规则
教学日历
第一章细胞培养技术
第一节细胞培养的基本原理和技术(1)
实验一细胞培养的基本技术(1)
实验二细胞培养液的配制(10)
第二节细胞培养的方法(15)
实验三观察细胞(15)
实验四细胞的传代培养(19)
实验五细胞计数及活力测定(23)
实验六培养细胞的冻存和复苏技术(25)
第二章细胞工程
实验七(1)细胞融合-聚乙二醇法(28)
实验七(2)细胞融合-电场法(31)
实验八动物染色体标本的制备与观察(33)
实验九设计性实验(36)
附录一细胞培养实验常设备(38)
附录二关于实验习惯记分若干规定(试行)(39)
附录三显微镜及其使(40)
附录四实验报告的书写(44)
附录五实验设计的意义、三要素和六原则(46)
主要参考资料(49)
第一章细胞培养技术
第一节细胞培养的基本原理和技术
细胞培养(cellculture)是指从生物体内取出组织或细胞,在体外模拟体内生理
环境,在无菌、适当温度和一定营养条件下,使之生存、生长和繁殖,并维持其结构和
功能的方法。现代生物技术一般认为包括基因工程技术、细胞工程技术、酶工程技术和
发酵工程技术,而这些技术的发展几乎都与细胞培养有密切关系,特别是在医药领域的
发展,细胞培养更具有特殊的作和价值。比如基因工程药物或疫苗在研究生产过程中
很多是通过细胞培养来实现的。细胞工程中更是离不细胞培养,杂交瘤单克隆抗体完全
是通过细胞培养来实现的,既使是现在飞速发展的基因工程也离不开细胞培养。正在倍
受重视的基因治疗、体细胞治疗也要经过细胞培养过程才能实现,发酵工程和酶工程有
的也与细胞培养密切相关。总之,细胞培养在整个生物技术产业的发展中起到了关键的
核心作。
实验一细胞培养的基本技术
【目的要求】
1.熟悉与细胞培养相关的几个概念。
2.掌握体外培养细胞的生存条件。
3.掌握培养用品的清洗和消毒原则。
4.初步掌握无菌作的基本要领和作要求。
【实验原理】
细胞培养是一种程序复杂、要求严谨的实验技术。要使细胞在体外长期生存,必须
模拟体内环境,供给细胞生存所必须的条件,如水、无机盐、氨基酸、维生素、葡萄糖、
生长因子等,还要受到温度、渗透压、pH等多种因素的影响。细胞培养用品的清洗、培
养用液的配制、除菌等均有严格的要求,特别是无菌作,是细胞培养成败的关键。本
实验分两部分进行,理论部分重点介绍培养用品的清洗和消毒,无菌作的基本要领和
要求,以及培养液的配制;实践部分分别在细胞培养准备间、细胞培养间进行。
【实验用品】
超净工作台,CO?培养箱,电冰箱,离心机,倒置相差显微镜,普通显微镜,水纯化装
置,抽滤装置,电子天平,液氮罐,洗刷装置,各类培养用品等。
11
1
/11
/II\I
500ml2000ml
无菌抽滤装置
co?培养箱倒置相差显微镜
水纯化装置
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