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目录

前H

实验室规则

教学日历

第一章细胞培养技术

第一节细胞培养的基本原理和技术(1)

实验一细胞培养的基本技术(1)

实验二细胞培养液的配制(10)

第二节细胞培养的方法(15)

实验三观察细胞(15)

实验四细胞的传代培养(19)

实验五细胞计数及活力测定(23)

实验六培养细胞的冻存和复苏技术(25)

第二章细胞工程

实验七(1)细胞融合-聚乙二醇法(28)

实验七(2)细胞融合-电场法(31)

实验八动物染色体标本的制备与观察(33)

实验九设计性实验(36)

附录一细胞培养实验常设备(38)

附录二关于实验习惯记分若干规定(试行)(39)

附录三显微镜及其使(40)

附录四实验报告的书写(44)

附录五实验设计的意义、三要素和六原则(46)

主要参考资料(49)

第一章细胞培养技术

第一节细胞培养的基本原理和技术

细胞培养(cellculture)是指从生物体内取出组织或细胞，在体外模拟体内生理

环境，在无菌、适当温度和一定营养条件下，使之生存、生长和繁殖，并维持其结构和

功能的方法。现代生物技术一般认为包括基因工程技术、细胞工程技术、酶工程技术和

发酵工程技术，而这些技术的发展几乎都与细胞培养有密切关系，特别是在医药领域的

发展，细胞培养更具有特殊的作和价值。比如基因工程药物或疫苗在研究生产过程中

很多是通过细胞培养来实现的。细胞工程中更是离不细胞培养，杂交瘤单克隆抗体完全

是通过细胞培养来实现的，既使是现在飞速发展的基因工程也离不开细胞培养。正在倍

受重视的基因治疗、体细胞治疗也要经过细胞培养过程才能实现，发酵工程和酶工程有

的也与细胞培养密切相关。总之，细胞培养在整个生物技术产业的发展中起到了关键的

核心作。

实验一细胞培养的基本技术

【目的要求】

1.熟悉与细胞培养相关的几个概念。

2.掌握体外培养细胞的生存条件。

3.掌握培养用品的清洗和消毒原则。

4.初步掌握无菌作的基本要领和作要求。

【实验原理】

细胞培养是一种程序复杂、要求严谨的实验技术。要使细胞在体外长期生存，必须

模拟体内环境，供给细胞生存所必须的条件，如水、无机盐、氨基酸、维生素、葡萄糖、

生长因子等，还要受到温度、渗透压、pH等多种因素的影响。细胞培养用品的清洗、培

养用液的配制、除菌等均有严格的要求，特别是无菌作，是细胞培养成败的关键。本

实验分两部分进行，理论部分重点介绍培养用品的清洗和消毒，无菌作的基本要领和

要求，以及培养液的配制；实践部分分别在细胞培养准备间、细胞培养间进行。

【实验用品】

超净工作台，CO?培养箱，电冰箱，离心机，倒置相差显微镜，普通显微镜，水纯化装

置，抽滤装置，电子天平，液氮罐，洗刷装置，各类培养用品等。

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1

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/II\I

500ml2000ml

无菌抽滤装置

co?培养箱倒置相差显微镜

水纯化装置