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朝医八物君子汤拮抗房颤及对Cx40、Cx43表达的影响

本文通过观察朝医八物君子汤拮抗房颤及对心房肌缝隙连接蛋白Cx40、

Cx43蛋白表达的影响得出结论，朝医八物君子汤具有拮抗乌头碱诱发房颤的作

用，其机制主要与提高Cx40、Cx43蛋白表达水平有关。

标签：朝医八物君子汤；房颤；Cx40；Cx43

朝医八物君子汤是来源于《东医寿世保元》中的少阴人方剂，其主要组成由

人参、黄芪[1]、白术、白芍、当归、川芎、陈皮，甘草等8味药物构成，具有

补脾和脾，补气和血之功效，临床上常可用于治疗少阴人惊悸、怔忡等疾病。本

研究通过采用急性房颤模型，观察和探讨八物君子汤对房颤大鼠心房肌CX40和

CX43蛋白表达、心房肌细胞微结构变化及对ANP分泌的影响，旨在阐明八物

君子汤拮抗房颤的作用机制。

1材料与方法

1.1动物与试剂

实验动物均采用雄性SD大鼠（体重为200±20g）。由延边大学实验动物科

提供，合格证号：SCXK（吉）2011-0007。八物君子汤的8味药材均购自延吉市

中医医院。乌头碱（美国Sigma公司）CX40和CX43多克隆抗体（美国Abcam

公司）、辣根过氧化物酶标记Ⅱ抗（北京中山生物技术公司）；ANP检测试剂盒

为北京北方生物技术研究所产品（批准号）。

1.2制备八物君子汤提取物

取人参100g、黄芪、白术、白芍、当归、川芎、陈皮、甘草各50g切碎，

分2次煎煮，每次加入10倍量的水，煎煮2h，将2次滤液混匀，用旋转蒸发仪

进行浓缩。冻干后，最终获得黄褐色粉末状药物，并储存于-20℃冰箱内备用。

1.3急性房颤模型的制备

用20%乌拉坦将雄性SD大鼠麻醉，快速开胸摘取心脏，并剥离左心房，将

其固定在Choi等研制的離体搏动心房灌流装置中。同时给予1.5Hz的电刺激（电

刺激时间为0.3ms；电压为30V）来维持体外左心房搏动，用氧饱和的HEPES

缓冲液[pH7.4；（mmol·L-1）：NaC1118，KC14.7，CaC122.5，MgC11.2，NaHCO3

25，葡萄糖10，HEPES10，牛血清白蛋白0.1%]对左心房组织进行持续性灌流，

灌流约60min心房搏动可达到稳定状态。急性房颤模型是在心房灌流模型建立

后，先经过1个正常对照循环（12min）灌流后，继以乌头碱（6×10-7mol/L）

诱发房颤的方法制备急性房颤模型，房颤以BL-420S生理记录仪上显示出现异

常心跳波作为急性房颤模型成功的标志。

1.4动物分组及药物干预

选择10只SD大鼠作为正常对照组，用氧饱和的HEPES缓冲液进行5个循

环（60min）的持续灌流。其余30只随机分为AI模型组（6×10-7mol/L）和AI+BJD

高剂量组（1×10-3g/mL）及AI+BJD低剂量组（3×10-4g/mL），每组各10只。

AI模型组在进行1个循环（12min）正常灌流后，进行4个循环（48min）的乌

头碱药物灌流；AI+BJD高低剂量组在进行1个正常循环（12min）和2个循环

（60min）BJD预处理后，在BJD持续灌流的状态下给予2个循环（24min）的

乌头碱进行灌流。

1.5乌头碱诱发房颤发生所需时间检测

各组大鼠在急性房颤模型和药物干预过程中，测定乌头碱诱发房颤发生所需

的时间变化的平均值。

1.6心房灌流液中ANP分泌量变化检测

各组大鼠在急性房颤模型和药物干预过程中，测定第1（12min）、第3（36

min）、第5（60min）循环结束前4min的ANP分泌水平变化的平均值。

1.7心房组织内CX40、CX43蛋白表达检测

采用Western-blot法检测在急性房颤和药物干预过程中心房组织内CX40、

CX43蛋白水平变化。灌流实验结束后迅速取出心房组织，称重后将根据组织蛋

白提取试剂盒要求提取总蛋白，并测定蛋白样品的浓度。制备10%SDS

凝胶，电泳分离后用半干转移法将分离胶内