β-葡萄糖苷酶的研究.pdf

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《饵斟工业》・２００６年麓２７一篇２２期

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王志江魏红福

１８３７年，Ｌｉｅｂｉｇ和Ｗｏｈｌｅｒ首次在苦杏仁汁中发是Ｂ一葡萄糖苷酶的另一来源，一般微生物发酵都采

现了Ｂ一葡萄糖苷酶。ｐ一葡萄糖苷酶（ＥＣ３．２．１．２１）的英用液态发酵。对于胞外酶来讲，发酵液即为粗酶液；对

文名是ｐ—ｇｌｕｃｏｓｉｄａｓｅ，属于水解酶类，又称Ｂ—Ｄ一葡萄于胞内酶，则需对微生物进行细胞破碎．使其释放出

糖苷水解酶，别名龙胆二糖酶、纤维二糖酶和苦杏仁Ｂ一葡萄糖苷酶。

苷酶。它可催化水解结合于末端非还原性的Ｂ—Ｄ一糖２．２３－葡萄糖苷酶的纯化方法

苷键，同时释放出配基与葡萄糖体。粗提的Ｂ一葡萄糖苷酶可采用硫酸铵沉淀或用乙

Ｂ一葡萄糖苷酶广泛存在于自然界中，它可以来源醇、丙酮等有机溶剂沉淀等方法初步分离。Ｂ一葡萄糖

于植物、微生物，也可来源于动物。Ｂ一葡萄糖苷酶的植苷酶的进一步纯化，往往是根据具体情况．采用多种

物来源有人参、大豆等；微生物来源的报道较多，如原方法逐步分离。目前分离Ｂ一葡萄糖苷酶的方法较多，

核微生物来源的有脑膜脓毒性黄杆菌Ｆ（ｌａｖｏｂａｃｔｅｒｉｕｍ其中离子交换柱层析和凝胶过滤柱层析两种手段结

ｍｅｎｉｎｇｏｓｅｐｔｉｃｕｍ）、约氏黄杆菌Ｆ（ｌａｖｏｂａｃｔｅｒｉｕｍｉｏｈｎｓｏｎ．合使用最为普遍，多数是先离子交换柱层析，后用凝

ａｅ）等，真核生物来源的有清酒酵母Ｃａ（ｎｄｉｄａｐｅｈａｔａ）、胶过滤柱层析。离子交换柱层析方法中常用的是阴离

黄孢原毛平革菌（Ｐｈａｎｅｒｏｃｈａｅｔｅｃｈｒｙｓｏｓｐｏｒｉｕｍ）等；Ｂ一子交换层析，如ＤＥＡＥ阴离子交换层析；同时，阳离子

葡萄糖苷酶的动物来源有蜜蜂、猪肝和猪小肠等。鉴交换层析法也有一定的使用。除上述两种分离方法

于Ｂ一葡萄糖苷酶的研究广泛，本文对其一些研究进外，也有其它层析方法用于分离Ｂ一葡萄糖苷酶，如使

展进行讨论。用疏水层析法和羟基磷灰石层析法等。此外，也有人

Ｂ一葡萄糖苷酶的１分类采用双水相萃取和亲和层析的方法来分离Ｂ一葡萄糖

Ｂ一葡萄糖苷酶按其底物特异性可以分为３类：第苷酶，但关于这方面的研究报道较少。

类是能水解烃基一Ｂ一葡萄糖苷或芳香基一Ｂ一葡萄糖２．３Ｂ一葡萄糖苷酶活性测定方法

一

苷的酶，此类Ｂ一葡萄糖苷酶能水解的底物有纤维二Ｂ一葡萄糖苷酶的活性测定方法很多．常见反应底

糖、对硝基苯一Ｂ—Ｄ一葡萄糖苷等；第二类是只能水解烃物有对硝基苯一Ｂ—Ｄ一葡萄糖苷（ｐＮＰＧ）、纤维二糖、水

基一Ｂ一葡萄糖苷的酶，这类Ｂ一葡萄糖苷酶能水解纤维杨苷等。由于酶与ｐＮＰＧ作用产生的对硝基苯可用分

二糖等；第三类是只能水解芳香基一Ｂ一葡萄糖苷的酶，光光度法在４００ｎｍ处测定，方法简单、反应快速、反

这类酶能水解对硝基苯一Ｂ—Ｄ一葡萄糖苷等类似物。应活性大，所以大多数实验采用ｐＮＰＧ作为底物的分

２Ｂ一葡萄糖苷酶的提取、纯化及酶活测定方法光光度法测定酶活性。由于测定葡萄糖含量的方法很

２．Ｂ一葡萄糖苷酶的１提取方法多，也有人通过测定葡萄糖含量来确定酶活力。孙迎

不同来源的Ｂ一葡萄糖苷酶，其提取方法也有所庆等用多种方法测Ｂ一葡萄糖苷酶活性，如以二糖或

不同。动植物体及大型真菌中的糖苷酶一般需要对酶