细胞产物分析技术质谱分析.ppt

要使气相色谱和质谱仪器联用，首先要解决的问题是气压问题。色谱柱出口压通常是常压，而质谱仪在正常工作压力是高真空，故二者无法相接。必须采用一个连接器，用来除去载气，以降低气相色谱流出物的气压并富集试样，以达到质谱仪的工作要求。如果色谱仪使用填充柱，必须经过一种接口装置——分子分离器，将色谱载气去除，使样品气进入质谱仪；如果色谱仪使用毛细管柱，则可以将毛细管直接插入质谱仪离子源，因为毛细管载气流量比填充柱小很多，不会破坏质谱仪真空。第31页,共42页，星期六，2024年，5月在GC/MS分析中，常用的离子源有电子轰击离子源（EI），化学电离源（CI），EI/±CI复合源，场致电离源（FI），大气压化学电离源（APCI）等。第32页,共42页，星期六，2024年，5月仪器结构色谱-四极杆质谱仪结构示意图第33页,共42页，星期六，2024年，5月LC-MS液质联用大多数高效液相色谱的组分是非挥发性的或热分解性的，这使得由液相转化为气相的任务更具有挑战性，尤其是要保证组分的完整性。最常用的三种连接方式是热喷雾(TSP）法、电喷雾（ESI）法和大气压电离（APCI）法。第34页,共42页，星期六，2024年，5月

液质联用流程图第35页,共42页，星期六，2024年，5月LC-MS分析条件的选择电离源的选择ESI和APCI在实际应用中表现出它们各自的优势和弱点。ESI适合于中等极性到强极性的化合物分子，特别是那些在溶液中能预先形成离子的化合物和可以获得多个质子的大分子（蛋白质）。只要有相对强的极性，ESI对小分子的分析常常可以得到满意的结果。APCI不适合多电荷的大分子分析，它的优势在于非极性或中等极性的小分子的分析。第36页,共42页，星期六，2024年，5月①电离方式ESI采用离子蒸发方式使样品分子电离，而APCI电离是放电探针促使溶剂和其它反应物电离、碰撞及电荷转移等方式形成了反应气等离子区，样品分子通过等离子区时，发生了质子转移。②样品流速APCI源允许的流量相对较大，0.2-2mL/min，而ESI源允许流量相对较小，最大只能为1.0mL/min。③断裂程度APCI源的探头处于高温，可使热不稳定的化合物分解，产生碎片；ESI源探头处于常温，常生成分子离子峰，不易产生碎片。④灵敏度都很高。ESI有利于分析生物大分子及其他分子量大的化合物，而APCI更适合于分析极性小的化合物。⑤多电荷APCI源不能生成一系列多电荷离子，所以不适合分析生物大分子。而ESI源特别适合于蛋白质、多肽类的生物分子，由于它能产生一系列的多电荷离子。第37页,共42页，星期六，2024年，5月流动相的选择常用的溶剂和缓冲液a水、乙腈及甲醇LC-MS理想的溶剂b乙酸和甲酸可降低LC流动相的pH值以提高分离度c氢氧化铵/氨溶液可提高LC流动相的pH值d乙酸铵是一种挥发性盐，用于缓冲流动相，并改善色谱分离而不影响MS的性能。最大浓度不超过0.1mol/L。第38页,共42页，星期六，2024年，5月不适合的溶剂和缓冲液a不挥发的盐b表面活性剂/洗涤剂c无机酸其它溶剂和调节剂a异丙醇、2-甲氧基乙醇及乙醇等b三氟醋酸（TFA）常用于LC-MS分析肽和蛋白质的化合物c三乙胺（TEA）d四氢呋喃（THF)第39页,共42页，星期六，2024年，5月应用示例第40页,共42页，星期六，2024年，5月高效液相色谱――电喷雾串联质谱法测定清开灵复方中胆酸采用HPLC/MS/MS技术，从清开灵注射液中，通过分子量、二级质谱碎片信息定性测定了清开灵复方中的胆酸。直接进样实验。清开灵注射液经过初步化学处理后采用电喷雾（ESI）离子源，在负离子扫描方式下，得到一极质谱图、即分子离子峰[M-H]-，再用二级质谱（MS/MS）扫描目标分子离子的碎片峰。再以相同的实验条件对标准品进行测定，做出其一级、二级质谱图。第41页,共42页，星期六，2024年，5月感谢大家观看第42页,共42页，星期六，2024年，5月**质量是物质固有特征之一，不同的物质有不同的质量谱。质谱分析技术是精确测定分子质量、分析化合物结构的重要工具。通过样品的质谱和相关信息，可以得到样品的定性、定量结果。**低熔点的金属（锌）及高分子化合物（多肽）原子质量单位??AtomicMassUnit

定义C原子质量的1/12为一个质量单位，简写为amu或u**2009年海归博士周震自主开发了“中国牌“飞行时间质谱。质谱仪以前主要是依靠进口，十分昂贵，检测费用也很高。**Thomson世界第一台质谱装置**Q