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实验一可溶性还原糖、
脂肪、蛋白质的鉴定
一、实验原理
水浴加
热
斐林试剂砖红色沉淀
v可溶性还原糖+
颜可溶性还原糖:葡萄糖、果糖、麦芽糖
色(蔗糖、淀粉都没有还原性)
反苏丹Ⅲ染液
应橘黄色
v脂肪+
苏丹Ⅳ染液红色
v蛋白质双缩脲试剂紫色
+
二、几种重要的试剂
甲液(0.1g/mL的NaOH溶液)
v斐林现配现用
试剂等量
乙液(0.05g/mL的CuSO溶液)
4混合均匀
A液(0.1g/mL的NaOH溶液)现配现用
v双缩脲先加A液
试剂再加B液
B液(0.01g/mL的CuSO4溶液)
四、实验方法与步骤
v1、可溶性还原糖的鉴定
(1)制备组织样液:苹果洗净、去皮、切块→
取5g加少许石英砂研磨→加5mL水再研磨→漏
斗垫纱布后过滤,得到样液
(2)鉴定样液:取2mL样液于试管中→注入2mL
刚配制的斐林试剂,振荡混合(淡蓝色)→
水浴煮沸2min左右,观察溶液颜色变化(先变
为棕色,再变为砖红色)
v2、脂肪的鉴定
(1)切片制作
(2)染色:在花生子叶切片上滴2~3滴苏丹Ⅲ
染液→2~3min中后,吸去染液→滴体积分数
为50%的酒精洗去浮色→吸去多余的酒精,再
滴1~2滴蒸馏水,盖上盖玻片
(3)镜检鉴定:在低倍物镜下观察,找到花生
子叶切片的最薄处,移至视野中央→转动转换
器,换用高倍物镜观察(脂肪滴:橘黄色的圆
形小颗粒)
v3、蛋白质的鉴定
(1)制备组织样液:浸泡黄豆1~2d→去皮、切成薄片,
加少许石英砂及5mL水研磨→漏斗垫纱布后过滤,得
到样液(用蛋清要稀释10倍以上,否则实验后黏住试
管壁不易洗净)
(2)鉴定样液:取2mL样液于试管Ⅰ中→加入2mL双缩
脲试剂A液摇匀(造成一个碱性环境)→加入双缩脲
试剂B液3~4滴,摇匀,注意颜色变化(溶液变为紫
色)。
五、注意事项
v良好的实验材料是实验成功的一半
v斐林试剂和双缩脲试剂的配制、使用方法和
用途。
v脂肪的鉴定,把化学反应和显微镜观察结合
起来,也称为显微化学反应。
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