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一抗、二抗的选择

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一抗的选择

•1.分析实验应用类型

•WB〔WesternBlot免疫印迹〕

•IHC〔immunohistochemistry免疫组织化学〕

•ELISA〔enzyme-linkedimmunoadsordent

assay酶联免疫吸附试验〕

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•2.样本蛋白的结构性质

蛋白片断或一种用含此片段域

•样本蛋白的结构域特殊的同型物或的免疫原制备

蛋白全长的某一

区域出的抗体。

•全长蛋白、蛋白片段、

多肽、用FACS流式检

用含该外表蛋

•细菌、细胞测活细胞的外表白的胞外域来

蛋白免疫制备的抗

•体。

•样本的提取和处理过程

•某些抗体要求样本经过

某些特殊处理，例如：

许多抗体只识别复原和

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变性的、表位已暴露不

•3.样本的物种

•

选择物种相同或有交叉反响的抗体，抗体

可能与不同物种的同种靶蛋白有交叉反响，

因其氨基酸序列同源性较高，如果样本的

种类未列入抗体说明书上的交叉反响种属

表中，并不意味着该抗体不适用于检测该

物种的蛋白，而只是表示该物种尚未用此

抗体检测验证过，应通过序列比对的方法

来预测交叉反响，可应用Expasy

和

NCBI

BLAST来进行不同物种蛋白同源性

比对。

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•4.一抗宿主物种的选择

•一般说来，在使用偶联二抗结合无偶联物的一抗时，一抗

宿主动物的物种选择较为重要，对于免疫组化而言，尽可

能选择与样本不同种系物种的一抗，从而防止二抗与样本

内源性免疫球蛋白产生交叉反响，

•例如：检测小鼠样本蛋白，那么不应选择小鼠或大鼠源的

一抗，最好选兔源的一抗，那么二抗那么可选择偶联了检

测分子〔酶、荧光素、生物素等〕的抗兔IgG。

•如果选择有偶联物的一抗那么不适用上述情况，除免疫组

化外的其它对不含内源性免疫球蛋白样本的检测方法，那

么抗体宿主物种的影响不大，如对不含IgG的细胞裂解物

样本的western

blotting检测，尽管如此，含有血清的组织

裂解物和组织培养上清中含有免疫球蛋白，复原变性样本

中含IgG，在western

blot检测中那么结合出现IgG分子

50

and

25

kDa的重链和轻链条带。

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二抗的选择

•1.一抗的种属来源

二抗应选用与使用的一抗相同的物种来源，

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•2.二抗的种属来源

•一般来说，不同的种属来源与二抗的质量

没有必然的联系，来源于山羊的二抗与来

源于驴的二抗在一般的实验里没有太多的

差异。

•