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培养基制备技术

南华大学预防医学与放射卫生实验教学中心

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n教学对象：高等医学院校卫生检验专业学生

n实验课时：4学时

n课程类型：专业实验课

n课程要求：必修

n每组人数：2人

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实验目的和要求

n掌握常用培养基制备的根本过程。

n熟悉常用培养基的种类及用途。

n熟悉高压蒸汽灭菌的使用。

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实验内容

n常用培养基〔液体培养基、半固体培

养基及固体培养基〕制备。

n高压蒸汽灭菌器使用。

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一、培养基的种类〔按用途分

类〕

n根底培养基

n营养培养基

n鉴别培养基

n选择培养基

n增菌培养基

n厌氧培养基

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培养基的种类〔按物理性状分

类〕

n液体培养基：

n不含凝固剂，用于增菌和接种纯种细菌。

n半固体培养基：

n0.3％～0.5％琼脂。

n用于观察细菌动力、保存菌种。

n固体培养基：平板、斜面。

n2％～2.5％琼脂。

n平板：用于细菌的别离培养。

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二、培养基制备的一般程序

调配溶化矫正pH

过滤澄清

分装

灭菌检定保存

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二、培养基制备的一般程序

n调配：按照培养基配方正确称取各种原料放于

搪瓷杯中。另用量筒量取所需蒸馏水量。

n溶化：在搪瓷杯中参加所需水量，玻棒搅匀，

加热溶解。

n加琼脂溶化：加热过程中要不断搅拌，可适当

补水。

n调pH值：用1NNaOH或1NHCl调至培养基规定的

pH值，用pH试纸对照。

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二、培养基制备的一般程序

n分装加塞：注意不要污染棉塞。塞好棉塞的试管

和锥形瓶应盖上厚纸用绳捆札，准备灭菌。

n灭菌：不同培养基采取不同灭菌方法。

n检定：培养基灭菌后必须在37℃下恒温培养24h，

确定无菌生长，方可使用。

n保存：一般至4℃保存备用。

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分装量的要求

n液体培养基

n分装量约为试管高度的1/4～1/3，加塞后灭菌直立；

n半固体培养基

n分装量为试管高度的1/4～1/3，加塞后灭菌趁热直立凝

固；

n斜面培养基

n分装量约为试管高度的1/4～1/3，加塞后灭菌，趁热摆

成斜面；

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灭菌后斜面摆放

n斜面长度约为试管长度的2/3，且下端有

1cm柱高；

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分装量的要求

n琼脂平板：

n先将灭菌琼脂融化后冷却至50℃左右，以无菌

操作倾注于灭菌平皿内，水平旋转平皿，待琼

脂凝固后将平皿翻转，置4℃保存备用。