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发根农杆菌介导甜瓜转基因过表达体系的建
立
作者：王平勇徐永阳赵光伟贺玉花李明孔维虎张健刘水苗刘梦丽徐志红
来源：《中国瓜菜》2019年第12期
摘要：遗传转化是实现基因功能验证和基因快速转育的重要手段，但目前甜瓜的遗传转
化依旧存在众多技术难题。笔者利用野生型发根农杆菌K599侵染甜瓜‘E31’，成功诱导甜瓜产
生了不定根。借助该技术，将含有GUS基因和EGFP基因的过表达载体pCAMBIA3301和
pCAMBIA1300-ProSuper导入发根农杆菌K599，利用转化后的农杆菌侵染甜瓜‘E31’，成功诱
导出了不定根。PCR检测结果表明，新生不定根的阳性率达到100%。通过GUS染色和激光共
聚焦显微镜检测，在不定根中检测到GUS基因和EGFP基因的大量表达，成功实现了外源基
因在甜瓜新生不定根内过表达。该方法周期短、操作方便、转化率高，可实现基因功能的快速
验证，为甜瓜根系抗病抗逆方面的研究提供技术支持。
关键词：甜瓜;发根农杆菌;K599;过表达
EstablishmentofAgrobacteriumrhizogenes-mediatedgeneoverexpressionsysteminmelon
WANGPingyong，XUYongyang，ZHAOGuangwei，HEYuhua，LIMing，KONG
Weihu，ZHANGJian，LIUShuimiao，LIUMengli，XUZhihong
（ZhengzhouFruitResearchInstitute，ChineseAcademyofAgriculturalSciences，
Zhengzhou450009，Henan，China）
Abstract：Genetictransformationisanimportantmeanstoverifygenefunctionandrapidgene
transfer，buttherearestillmanytechnicaldifficultiesformelon.Inthisstudy，Agrobacterium
rhizogenesK599wasusedtoinfectmelon‘E31’andsuccessfullyinducedtheformationof
adventitiousroots.Withthistechnique，theoverexpressionvectorspCAMBIA3301and
pCAMBIA1300-ProSupercontainingGUSgeneandEGFPgene，respectively，wereintroduced
intoA.rhizogenesK599.ThemodifiedA.tumefaciensK599wasusedtoinfectmelon‘E31’and
rateofnewadventitiousrootswas100%.TheexpressionofGUSandEGFPgenesinadventitious
rootsweresuccessfullydetectedbyGUSstainingandconfocallasermicroscopy.Thismethodhasthe
advantagesofshortcycle，easyoperation，hightransformationrate，andcanverifygenefunction
inmelonrapidly.Itwillprovidetechnicalsupportfortheresearchonthemechanismofdiseaseor
stressresistanceinmelonroot.
Keywords：Melon;Agrobacteriumrhizogenes;K599;Overexpression
甜瓜（CucumismeloL.）在我國是一种重要的水果型蔬菜作物。我国自20世纪80年代以
来，一直是世界上甜瓜种植面
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