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维普资讯
３９０
ｑＡｃｔａＡｃａｄＭｅｄＷｅｉｆａｎｇＶｏ１．２９Ｎｏ５２００７
．
妥钠腹腔内麻醉，然后固定于江湾Ⅱ型立体定位仪上，的琼脂糖凝胶上电泳，５Ｖ／ｃｍ，４５ｍｉｎ，用自动成像仪
经消毒后正中尸状切ＫＩ，按照ＬｏｕｉＪ．ＰｅｌｓｌｅｇｒｉｎｏＡＳｔｅ—（美国ＦＯＴＯＤＹＮＥ公司）观察拍照。重复实验的电泳
ｒｅｏｔａｘｉｃＡｔｌａｓｏｆｔｈｅＲａｔＢｒａｉｎ鼠脑图谱于前颅前图谱用ＳＴＯＲＭ８６０荧光扫描分析仪（美国ＤＹＮＡＭＩＣ
２ｍｍ，中线旁开２．５ｍｍ处用自制打孔钻打开颅骨一小公司）分析，相对表达量根据各电泳区带与内对照Ｂ—
孔，固定移动装置，垂直进入微型注射针头７—８ｍｍａｃｔｉｎ的面积之比来计算。以［５－ａｃｔｉｎ为内参照，按公
（即相当于基底核区），轻轻注入１ｇ海人酸（１ｇ／Ｌ），式ｐ—ＡＰＰ／ｐ—ａｃｔｉｎ计算Ｂ～ＡＰＰｍＲＮＡ水平。
静留针１—２ｍｉｎ后，缓慢移动装置退针，先用石蜡粉溶１．４．６统计学处理数据以ｘ±ｓ表示，使用ＳＰＳＳ１０．
化后封住颅骨开口，再在封口上撒适量青霉素和链霉０统计软件处理。
素粉剂后缝合皮肤。
２结果
１．４．２痴呆动物的分组及给药方法ＳＤ大鼠经造模
后显示水迷宫逃生的记忆能力降低，使在水中的游动中药呆聪液对痴呆大鼠Ｂ—ＡＰＰ基因转录的影响
持续时间明显延长，将造模后的大鼠随机分为４组，每（见表１）。从实验结果看出，痴呆模型组Ｂ—ＡＰＰｍＲ—
组１０只，即痴呆模型组、中药一组（５ｇ・ｋｇｄ）、中ＮＡ的表达量较空白对照组明显升高（Ｐ＜０．０５），各给
药二组（１０ｇ・ｋｇｄ）、中药三组（２０ｇ・ｋｇｄ）和药组Ｂ—ＡＰＰｍＲＮＡ的表达量与痴呆模型组相比明显
正常对照组。根据每日的中药量灌胃给药，痴呆模型降低（Ｐ＜０．０５）。ＲＴ—ＰＣＲ扩增产物琼脂糖电泳结果
组和正常对照组用生理盐水１０ｍｌ／（ｋｇ・ｄ）灌胃，１个显示（见图１），呆聪液中剂量组效果最佳。
月后取脑标本。
１．４．３大鼠脑组织ＲＮＡ的提取参照Ｔｒｉｚｏｌ试剂说表１呆聪液对痴呆大鼠５［－ＡＰＰ基因转录的影响
明书方法提取脑细胞总ＲＮＡ，紫外分光光度法测定总
ＲＮＡ浓度，Ａ２６０ｎｍ／Ａ２８０ｎｍ为１．８—２．０，提取总
ＲＮＡ于一７０℃保存。
１．４．４引物的设计与合成Ｂ—ＡＰＰｍＲＮＡ，ｐ—ａｃｔｉｎ
通过Ｈｔｔｐ：／／ｗｗｗ．ｎｃｂｉ．ｎｌｍ．ｎｉｈ．ｇｏｖ获得ｃＤＮＡ序列，
采用Ｐｒｉｍｅｒ５引物设计软件，获得最佳ＰＣＲ引物，引
与痴呆模型组比较Ｐ，＜０．０５
物由上海生工生物工程有限公司合成。Ｂ—ＡＰＰ上游引
３讨论
物（５一ＡＡＴＣＣＴＧＣＡＧＴＡＣＴＧＣＣＡＡＧ一３，），下游引物（５
ＴＧＧＣＡＡＣＡＧＴＡＣＴ
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