《大豆品种对大豆花叶病毒病田间抗性鉴定技术规程》征求意见稿.docx

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T/BJNZJXXXX—2024

大豆品种对大豆花叶病毒病田间抗性鉴定技术规程

1范围

本文件规定了大豆花叶病毒病田间抗性鉴定的鉴定设计、大豆花叶病毒接种体制备、接种、病情调查、抗性评价、鉴定记载表格。

本文件适用于各类大豆品种、品系、农家种及野生豆资源对大豆花叶病毒病田间鉴定圃的设置、抗性鉴定与评价。

2规范性引用文件

下列文件中的内容通过文中的规范性引用而构成本文件必不可少的条款。其中，注日期的引用文件，仅该日期对应的版本适用于本文件；不注日期的引用文件，其必威体育精装版版本（包括所有的修改单）适用于本文件。

GB/T19557.4植物品种特异性、一致性和稳定性测试指南大豆NY/T3428—2019大豆品种大豆花叶病毒病抗性鉴定技术规程

3术语和定义

NY/T3428—2019界定的术语和定义适用于本文件。

4鉴定设计

4.1鉴定环境

选择田间防虫网室进行人工接种鉴定试验，网室需具备良好的自然发病条件和可控的灌溉条件，适宜温度在（25±3）℃。网室内土地平整后覆盖尼龙地膜，抑制杂草生长。及时防治大豆蚜虫，以免蚜虫传毒导致交叉感染。

4.2试验设计

鉴定材料随机排列，且每批次鉴定试验均设置感病和抗病对照。对照及鉴定材料设计3次重复，每份材料每次重复接种15～20株健康幼苗。

4.3试验对照品种

选择已知且表型稳定的感病和抗病材料作为对照品种，感病对照可选择南农1138-2（国内大豆）和Williams82（国外大豆），抗病材料可根据国内外大豆鉴别寄主接种试验选择，如早熟18、齐黄1号和科丰1号（国内大豆）等，或是PI96983、L29和V94-5152（国外大豆）等。

4.4株系选择

选择我国不同大豆生态区优势毒株作为病毒鉴定株系，或有明确来源的国内病毒株系如SC1-SC22株系。

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4.5鉴定材料播种

精选待鉴定的大豆种子和对照材料，剔除表皮斑驳的种子，避免种子带毒影响鉴定结果。种子质量应符合GB/T19557.4的规定。将种子播种于3加仑塑料花盆中，每份材料播种3盆，每盆20粒。当大豆幼苗生长到第一片真叶完全展开后，剔除发育畸形和发育阶段不一致的幼苗后开始接种试验。

5大豆花叶病毒接种体制备

5.1病毒分离

田间采集具有典型大豆花叶病毒病症状的大豆叶片，通过人工摩擦接种在感病大豆材料上分离纯化病毒分离物。采用生物学鉴定及血清学鉴定等方法，确定分离株系为大豆花叶病毒（Soybeanmosaicvirus，SMV）（参见NY/T3428—2019中附录A的A.1）。

5.2病毒株系鉴定

将分离纯化后的病毒接种于大豆鉴别寄主上进行致病性鉴定，通过不同大豆材料上的抗感表型组合推测分离病毒属于何种国内株系（参见NY/T3428—2019中附录A的A.2）。或通过提取感病叶片RNA后反转录合成cDNA，以其为模板扩增病毒衣壳蛋白基因后测序，在数据库中比对确定病毒类型及其与已知SMV病毒株系的亲缘关系。

5.3接种体的繁殖和保存

5.3.1接种体的繁殖

将供试株系人工摩擦接种在感病品种的无毒株上隔离繁殖，显症后采集上部具有典型花叶症状的新鲜病叶用作接种毒源。

5.3.2接种体的保存

病毒株系可活体保存在防虫网室或人工气候箱内种植的大豆幼苗上，也可将病叶保存在-80℃超低温冰箱中。

6接种

6.1接种时期

接种时期在大豆植株的单叶叶片充分展开时。

6.2接种液制备

将研钵、研棒和毛刷清洗干净并用超纯水冲洗三遍后晾干，研钵和研棒用无水乙醇灼烧，毛刷用紫外消毒半小时以上，防止侵染大豆时有病毒残留或交叉感染。在繁毒大豆植株上采集典型花叶病症状的新鲜叶片置于研钵中，按1：10的质量/体积比（g/mL）加入0.1mol/L磷酸缓冲液（8.64gNa2HPO4·12H2O，1.05gKH2PO4，加去离子水溶解后调节pH至7.3～7.4，定容到1000mL），加入少许绿色碳化硅（600目）后充分研磨成绿色汁液备用。

6.3接种方法

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采用人工摩擦接种法。接种时戴上橡胶手套，手指沾取少量绿色碳化硅摩擦大豆叶片产生轻微伤口，再用毛刷沾带有病毒的汁液均匀涂抹整个叶片上。待叶片稍干后，用去离子水冲洗叶片去除多余的病毒汁液及细微残渣，晾干几分钟后重复涂抹带病毒汁液一次，用去离子水冲洗。

7病情调查

7.1调查时间

一般在接种20