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大鼠皮肤类过敏试验的方法学研究及适用性考察

目的研究大鼠皮肤类过敏试验方法的适用性和可靠性，对中药注射剂潜在

的类过敏反应进行检测和评价。方法以C48/80为工具药物，对可能影响大鼠皮

肤类过敏试验的灵敏度和可靠性因素进行比较研究，优选最佳试验条件，选用

Tween80、内毒素、中华眼镜蛇毒素、天花粉蛋白注射液、痰热清注射液和血塞

通注射液进行考察和应用。结果大鼠皮肤类过敏反应试验方法最佳条件为：采

用胰岛素注射器（口径0.33mm）进行药物注射，50～100μL/点，给药后立即尾

静脉注射0.5%伊文思蓝染液1mL，15min时颈动脉放血处死大鼠，剪取背部皮

肤处理。采用该方法，Tween80、内毒素、中华眼镜蛇毒素、天花粉蛋白注射液

均呈现一定的诱导大鼠皮肤出现蓝斑的能力，痰热清注射液给予临床剂量无蓝斑

出现。血塞通注射液临床剂量虽可引起大鼠皮肤蓝斑，但不排除与因其本身的药

效作用干扰所致。结论该方法操作简便，试验周期短，需用药量少，检测敏感

性高，结果重复性好，但易受药物本身特性干扰而出现假阳性。

标签：大鼠皮肤试验；类过敏；方法学研究；C48/80；内毒素；血塞通注射

液；痰热清注射液

类过敏反应发生时，机体出现皮肤瘙痒、颜面潮红、皮疹、全身低血压、水

肿、呼吸急促等症状，其中皮肤红斑、皮疹等损害是最常见的症状[1]，症状较

轻时即会出现，皮肤症状反应对类过敏反应的发生及程度具有一定代表性。本研

究围绕类过敏发生时大鼠皮肤反应特点设计试验，以C48/80为工具药物，对药

物最佳作用时间进行探索，对可能影响试验灵敏度和可靠性的因素，包括动物性

别、药物剂量、染液浓度、皮内注射容积、注射器类型及注射针头口径等进行比

较研究，优选最佳试验条件。在此基础上，选用Tween80、内毒素、中华眼镜蛇

毒素、天花粉蛋白注射液、痰热清注射液和血塞通注射液，对试验方法的适用性

和可靠性进行考察，对中药注射剂潜在的类过敏反应进行检测和评价。

1实验材料

1.1动物

SD大鼠，清洁级，雌雄兼用，180～220g，购自上海西普尔-必凯实验动物

有限公司，动物许可证号：SCXK（沪）2008-0016，饲养于上海中医药大学实验

动物中心SPF级饲养室，实验期间自由饮水、摄食，室内温度20～22℃。

1.2药物

C48/80，Sigma公司产品，批号039K4023，加生理盐水（NS）配制成15μg/mL

浓度。Tween80（V/V），Sigma公司产品，批号BCBF4913V，加生理盐水配制

成0.5%、2.0%、8.0%3种浓度。内毒素，Sigma公司产品，批号L2880，加生

理盐水配制成25、50、100μg/mL。中华眼镜蛇毒素，上海普振生物科技有限公

司提供，批号N3MCC9LE，加生理盐水配制成1、5、25μg/mL3种浓度。天花

粉蛋白注射液，上海金山制药厂产品，批号111101，加生理盐水配制成0.05、

0.25、1.20mg/mL（原液）3种浓度。血塞通注射液，昆明制药厂产品，批号

，50mg/mL（原液）。试验时用1mL无菌注射器吸取原液加生理盐水

配制成6.25、12.5、25mg/mL（临床高浓度的4、8、16倍浓度）药液备用。痰

热清注射液，上海凯宝药业股份有限公司产品，批号1210221，10mL/支。试验

时加生理盐水配制成0.04（临床滴注低浓度）、0.1mL/mL（临床滴注高浓度）药

液备用。

1.3主要试剂与仪器

分析纯丙酮（国药集团化学试剂有限公司，批号；伊文思蓝（国

药集团化学试剂有限公司，批号），组胺ELISA试剂盒（Demeditec

产品，批号11411）。紫外分光光度计（AGILENT8345），2-16K离心机（Sigma

公司）。

2统计学方法

采用SPSS19.0统计软件进行分析。计量资料采用—x±s表示，两组间比较

采用t检验，多组间比较采用单因素方差分析，组间两两比较方差齐性时采用

LSD检验，方差不齐时用Dunnett’s方法检验。P＜0.05表示差异有统计学意义。

3试验方法与结果

3.1试验方法初步建立

SD大鼠6