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选修1生物技术理论

第一部分微生物的利用

试验1大肠杆菌的培育与别离

一、大肠杆菌

1．大肠杆菌属于革兰氏阴性细菌，为兼性厌氧的肠道杆菌。

2．用处：是基因工程技术中被广泛承受的工具。

二、本试验的内容是将大肠杆菌扩大培育与划线别离。别离后，一个菌体便会形成一个菌落，这是消退污染杂菌的通用方法，也是用于选择高表达量菌株的最简便方法之一。

本试验用LB液体培育基〔通用的细菌培育基〕扩大培育大肠杆菌，培育后用LB固体平面培育基进展划线别离。

细菌的培育与别离

1．细菌的培育：

〔1〕繁殖方式：细菌以分裂的方式繁殖，分裂速度很快，约20min分裂一次。

〔2〕培育的方法：须要将已有细菌的培育物转移到新的培育基中，一般用接种环来转移带菌的培育物。

2．细菌的别离

别离的方法与特点：

划线别离法：操作简洁。〔接种环〕

涂布别离法：操作困难，单菌落更易分开。〔玻璃刮刀〕

四、灭菌操作

1．灭菌操作的缘由：获得纯净的培育物的关键是防止外来杂菌的入侵污染。

2．无菌操作的条件：

〔1〕各种器皿必需是无菌的。〔首要条件〕

〔2〕各种培育基必需是无菌的。

“细菌喜荤，霉菌喜素〞

细菌培育基要用蛋白胨与酵母提取物来配制，还要参与确定量的氯化钠，以维持确定的浸透压。在中性偏碱的环境中生长〔制备培育基时需调整培育基的酸碱度〕。

霉菌培育基一般用无机物配制或添加蔗糖的豆芽汁即可。在中性偏酸的环境中生长〔制备培育基时需调整培育基的酸碱度〕。

假设培育基中有葡萄糖，为防止葡萄糖分解碳化，要用500g/cm2压力〔90℃以上〕灭菌30min.

3．灭菌的方法：是指杀灭病原微生物的方法。

〔1〕灼烧灭菌

〔2〕干热灭菌：160-170℃下加热1-2h。

〔3〕高压蒸气灭菌：100kPa、121℃(1kg/cm2)下维持15min.

〔4〕过滤灭菌：G6玻璃砂漏斗过滤〔用于有些不能加热灭菌的化合物，如尿素加热会分解〕

4．消毒的方法：是指杀灭或去除环境中一切微生物〔包括芽胞、孢子〕的方法

〔1〕煮沸消毒法：100℃煮沸5-6min

〔2〕巴氏消毒法：70-75℃下煮30min或80℃下煮15min

〔3〕化学药剂消毒法：用75%酒精、新洁尔灭等进展皮肤消毒;氯气消毒水源

〔4〕紫外线消毒

五、大肠杆菌的培育与别离试验

1．试验步骤：

〔1〕培育基灭菌：将50mlLB液体培育基、50mlLB固体培育基加上封口膜与培育皿用牛皮纸包好进展高压蒸汽灭菌。〔封口膜的作用是既通气又不使菌进入〕

〔2〕倒平板：将有培育基的三角瓶与培育皿放到超净台上，翻开紫外灯与过滤风

〔3〕接种：接种环接种，在37℃振荡培育12h

〔4〕划线别离：在酒精灯火焰上灼烧接种环，接种环只在菌液中蘸菌液一次，然后在固体培育基的平板上连续划线，盖好培育皿，将培育皿倒置，放在37℃恒温培育箱中培育12-24h，可看到在划线的末端出现不连续的单个菌落。

〔5〕菌种保存：用接种环取出单菌落，用划线法接种在斜面上，37℃培育24h后，置于4℃冰箱中保存

试验2别离以尿素为氮源的微生物

一、脲与脲酶

1．脲或称尿素，是蛋白质降解的产物。

2．脲酶：有些细菌可以尿素为氮源，这些细菌含有脲酶

〔1〕可降解尿素的酶

〔2〕作用原理：细菌合成的脲酶能将尿素分解成NH3，致使pH上升，使酚红指示剂变红。

二、试验设计及步骤

1．试验中的比照设置：

试验组：以全养分LB固体培育基进展培育〔蛋白胨，酵母提取物，氯化钠，琼脂糖，水〕

比照组：以尿素固体培育基进展培育〔葡萄糖，氯化钠，K2HPO4，酚红，琼脂糖，水〕

参与通过G6玻璃漏斗过滤〔使之无菌〕的10ml尿素溶液〔内含2g脲〕

2．试验步骤：

〔1〕制备培育基：将已灭菌的LB固体培育基与尿素固体培育基在酒精灯旁分别倒入两个培育皿中，在程度的超净台上摇匀，平放至凝固。

〔2〕制备细胞悬液：用1g土样配制不同浓度的细胞悬液〔加无菌水稀释〕。

〔3〕用涂布别离法别离细菌：将不同浓度的土壤稀释液分别参与到有LB培育基与尿素培育基的培育皿中，再将保存在70%酒精中的玻璃刮刀放在酒精灯火焰上，待刮刀上火焰熄灭。在酒精灯火焰旁翻开培育皿，将菌液涂布到整个平面上。

〔4〕培育：倒置培育皿，在37℃恒温培育箱中培育24-48h

〔5〕视察：培育基中的菌落数。

试验4果汁中的果胶与果胶酶

一、果胶

1．化学组成：半乳糖醛酸与半乳糖醛酸甲酯

2．作用：〔1〕植物细胞壁的主要成分〔2〕将植物细胞粘合在一起〔去掉果胶植物组织变得松散〕

3．鉴别方法：果胶不溶于酒精

二、果胶酶

1．来源：黑曲霉、苹果青霉等微生物

2．作用：

3．应用：

〔1〕应用原理：水解果胶，使水果组织的分散性加大。

〔2〕果汁消费：进步出汁率与澄清度。

三、探究制作果汁的最正确条件

试验流程：

95%的乙醇用