菊花组织培养课件.pptVIP

供参考的配方1、诱导菊花愈伤组织：在MS培养基中加入BA和NAA，质量浓度均为0.5mg／Ｌ２、诱导菊花从芽：在MS培养基中加入BA和NAA，质量浓度分别为23mg／Ｌ和0.02—0.03mg／Ｌ3.诱导菊花生根：在MS培养基各成分用量减半，并添加入NAA或IAA，质量浓度均为0.1mg／ＬPage?*4.温度、光照、pH的影响光照:菊花每日用日光灯照射12h。温度:大多数植物组织培养控制在23～27℃，低于15℃时植物组织会表现生长停止；高于35℃时对植物生长不利。菊花的组织培养控制在18～22℃。pH:不同植物对培养基最适pH的要求不同，大多数控制在5～6.5。菊花的组织培养控制在5.8左右。Page?*制备MS固体培养基外植体消毒接种培养栽培四、实验操作移栽冲洗—酒精—无菌水冲洗—氯化汞—无菌水冲洗至少三次之上配制各种母液配制培养基灭菌Page?*（一）制备MS固体培养基MS培养基包括20多种营养成分,实验室一般使用4℃保存配制好的培养基母液来制备1.配制各种母液①无机物中大量元素浓缩10倍,微量元素浓缩100倍,常温保存②激素类、维生素类以及用量较小的有机物一般可按1mg/ml的质量浓度单独配制成母液③用母液配制培养基时,需要根据各种母液的浓缩倍数,计算用量Page?*2.配制培养基分装到锥形瓶中,每瓶分装50ml或100ml①（）②（）③（）由于菊花的茎段的组织培养比较容易,因此不必添加植物激素3.灭菌分装好的培养基连同其他器械一起进行高压蒸汽灭菌配制培养液调PH培养基的分装Page?*在植物组织培养的过程中，为什么要进行一系列的消毒、灭菌，并且要求无菌操作？Page?*1、植物组织培养所利用的植物材料体积小、抗性差，对培养条件的要求较高：2.用于植物组织培养的培养基同样适合于某些微生物的生长,微生物产生的代谢废物会毒害培养的对象；培养物一旦受到微生物的污染，就会导致实验前功尽弃；因此要进行严格的无菌操作。Page?*1.选材：（二）外植体消毒2.消毒①流水冲洗菊花茎段用流水冲洗后可少许洗衣粉,用软刷轻轻刷洗,刷洗后在下冲洗20min左右②酒精处理用无菌吸水纸吸干外植体表面的水分,放入中摇动2－3次,持续6－7s,立即将外植体取出,在无菌水中清洗③消毒液处理取出后用吸干外植体表面的水分,放入中1－2min,取出后在无菌水中至少清洗3次,漂净消毒液流水菊花茎段,取生长旺盛的嫩枝体积分数为70％的酒精质量分数为0.1％的氯化汞溶液无菌吸水纸Page?*（三）接种1、接种前用体积分数70%酒精擦拭工作台，点燃酒精灯，所有操作在酒精灯旁边进行，每次使用器械后都要灼烧灭菌2、将装有培养基的锥形瓶整齐的排列在酒精灯左侧，将消过毒的菊花茎段在无菌培养皿中切成小段（0.5-1cm）3、左手持锥形瓶，右手拉开捆扎锥形瓶的绳子，并将封口膜攥于右手手心，以避免封口膜接触瓶口的一面被污染。左手持瓶，使瓶口旋转通过火焰。4.右手用镊子夹取菊花茎段，插入培养基中，不要倒插，每瓶6-8块外植体，接种后，将封口膜重新扎好。Page?*Page?*5.接种注意事项①每接种一块外植体前,镊子需放入体积分数为70％的酒精溶液中消毒一次,然后在酒精灯火焰上烧一遍,冷却后再接种②外植体在培养基中要分布均匀,放置外植体数量根据锥形瓶的大小确定,一般胡萝卜3－4块,菊的茎或叶6－8块,也不要太少,以充分利用培养基中的营养成分和光照条件③插入时应注意方向:（）不要倒插。茎段、茎尖基部插入培养基利于吸收水分和养分形态学上端朝上,形态学下端朝下Page?*思考：你打算做几组重复？你打算设置对照实验吗？答:每种材料或配方至少要做一组以上的重复。设置对照实验可以取用一个经过灭菌的装有培养基的锥形瓶，与接种操作后的锥形瓶一同培养，用以说明培养基制作合格，没有被杂菌污染。Page?*（四）培养接种后的锥形瓶最好放在无菌箱中培养,培养期间应定期消毒培养温度控制在18-22℃每日用日光灯