肉与肉制品中单核细胞增生李斯特氏菌和大肠埃希氏菌0157：H7的快速检测方法.pdf

res67.oso

X04

DB64

宁夏回族自治区地方标准

DB64/T1683-2019

肉与肉制品中单核细胞增生李斯特氏菌和

大肠埃希氏菌0157:H7的快速检测方法

2019-12-18发布2020一03-17实施

宁夏回族自治区市场监督管理厅发布

0864/T1683-2019

目IJ~

本标准是按照GB/T1.1-2009《标准化工作导则第1部分：标准的结构和编写》给出的规则编写。

本标准由宁夏回族自治区食品检测研究院提出。

本标准由宁夏回族自治区市场监督管理厅归口并组织实施。

本标准起草单位：宁夏回族自治区食品检测研究院、宁夏回族自治区食品药品审评查验中心。

本标准主要起草人：邓军、夏莉娟、高俊峰、冯秀娟、李雯、董川｜、赵艳。

I

0864/T1683一－2019

肉与肉制品中单核细胞增生李斯特氏菌

和大肠埃希氏菌0157:H7的快速检测方法

1范围

本标准规定了肉与肉制品中单核细胞增生李斯特氏菌检测的环介导恒温核酸扩增（LAI\在p）的方法。

本标准规定了肉与肉制品中大肠埃希氏菌0157:H7检测的环介导恒温核酸扩增（LAI\在p）的方法。

本标准适用于肉与肉制品中单核细胞增生李斯特氏菌的定性检测。

本标准适用于肉与肉制品中大肠埃希氏菌0157:H7的定性检测。

2规范性引用文件

下列文件对于本文件的应用是必不可少的。凡是注日期的引用文件，仅注日期的版本适用于本文件。

凡是不注日期的引用文件，其必威体育精装版版本（包括所有的修改单）适用于本文件。

GB4789.30-2016食品安全国家标准食物微生物学检验单核细胞增生李斯特氏菌检验

GB4789.36-2016食品安全国家标准食物微生物学检验大肠埃希氏菌0157:H7/NM检验

GB/T6682分析实验室用水规格和试验方法

GB19489实验室生物安全通用要求

GB/T27403实验室质量控制规范食品分子生物学检测

3缩略语

DNA(deoxyribonucleicadd）：脱氧核糖核酸。

dNTPCdeoxyribonucleosidetriphosphate）：脱氧核昔三磷酸。

LAI\在P(loop-mediatedisothermalamplification）：环介导恒温扩增。

价E：肠出血性大肠杆菌CEHEC)0157:H7菌株特有的毒力基因

TritonX-100：聚乙二醇辛基苯基醋。

virR：单核细胞增生李斯特氏菌致病因子编码基因。

4生物安全措施

按照GB19489中的有关规定执行。

5防污染措施

防止污染措施应符合GB/T27403的规定。

6原理

DB64/T1683-2019

利用环介导恒温扩增（LAI\在p）技术进行单核细胞增生李斯特氏菌、大肠埃希氏菌0157:H7的筛

选检测。根据单核细胞增生李斯特氏菌特有的νirR基因序列（参见附录A），大肠埃希氏菌0157:H7

特有的价E基因序列（参见附录B）分别设计一套特异性引物，特异性识别靶序列上的六个独立区域。

利用BstDNA聚合酶启动循环链置换反应，分别在单核细胞增生李斯特氏菌virR特异基因序列，大肠

埃希氏菌0157:H7功E特异基因序列启动互补链合成，